A method for the stepwise creation of phosphodiester bonds between desired
nucleosides resulting in the synthesis of polynucleotides having a
predetermined nucleotide sequence by preparing an initiation substrate
containing a free and unmodified 3'-hydroxyl group; attaching a
mononucleotide selected according to the order of the predetermined
nucleotide sequence to the 3'-hydroxyl of the initiating substrate in a
solution containing a catalytic amount of an enzyme capable of catalyzing
the 5' to 3' phosphodiester linkage of the 5'-phosphate of the
mononucleotide to the 3'-hydroxyl of the initiating substrate, wherein the
mononucleotide contains a protected 3'-hydroxyl group, whereby the
protected mononucleotide is covalently linked to the initiating substrate
and further additions are hindered by the 3'-hydroxyl protecting group.
Methods in which a mononucleotide immobilized on a solid support is added
to a free polynucleotide chain are also disclosed.
Een methode voor de trapsgewijze verwezenlijking van phosphodiesterbanden tussen gewenste nucleosiden die in de synthese van polynucleotiden resulteren die een vooraf bepaalde nucleotideopeenvolging hebben door een initiatiesubstraat voor te bereiden die vrije en ongewijzigde een 3'-hydroxyl groep bevatten; het vastmaken van mononucleotide die volgens de orde van de vooraf bepaalde nucleotideopeenvolging wordt geselecteerd aan de 3'-hydroxyl van het het in werking stellen substraat in een oplossing die een katalytische hoeveelheid enzym geschikt om de 5 ' aan 3 ' bevat phosphodiesteraaneenschakeling van het 5'-fosfaat van mononucleotide aan de 3'-hydroxyl van het het in werking stellen substraat te katalyseren, waarin mononucleotide beschermde een 3'-hydroxyl groep bevat, waardoor beschermde mononucleotide covalent verbonden met het het in werking stellen substraat en de verdere toevoegingen is wordt door de 3'-hydroxyl belemmerd die groep beschermt. De methodes waarin mononucleotide die op een stevige steun wordt geïmmobiliseerd aan een vrije polynucleotideketting wordt toegevoegd worden ook onthuld.
