A fully integrated monolithic small volume PCR-CE device in glass, or the
like materials, is fabricated using thin film metal heaters and
thermocouples to thermally cycle sub-microliter PCR volumes. Successful
amplification of a PCR fragment is demonstrated on a PCR-CE chip. The
process utilizes a linear polyacrylamide surface coating coupled with
addition of BSA to the amplification buffer was necessary to obtain
amplification efficiencies comparable to a positive control. The
micro-reactor reduced significantly the time required for amplification
and the reaction volume was in the sub-microlitre regime. Likewise
addressed are the known problems connected with reliable microfabrication
of metal coatings and the insulating layers required to shield these
layers from the PCR reaction mix, and the longstanding unresolved issue of
exposed metal regions in the PCR-CE chip resulting in electrolysis of
water and bubble formation whenever a voltage is applied. The instant
teachings employ external heaters and thermocouples and, as such, have
alleviated many of these problems. Heaters and thermocouples may still be
thin film deposited after chip bonding allowing for easy scale-up to
multichannel devices. In addition, direct deposition of these chip
components insures good thermal contact with the PCR reactor.
Um dispositivo pequeno monolítico inteiramente integrado do volume PCR-CE no vidro, ou os materiais semelhantes, são fabricados usando calefatores e thermocouples do metal da película fina dar um ciclo tèrmica volumes de secundário-microlitro PCR. O amplification bem sucedido de um fragmento de PCR é demonstrado em uma microplaqueta de PCR-CE. O processo utiliza um polyacrylamide que linear o revestimento de superfície acoplado com adição de BSA ao amortecedor do amplification era necessário para obter as eficiências do amplification comparáveis a um controle positivo. O micro-reactor reduziu significativamente o tempo requerido para o amplification e o volume da reação estava no regime secundário-microlitre. Do mesmo modo são dirigidos os problemas sabidos conectados com o microfabrication de confiança de revestimentos do metal e as camadas isolando requeridas para proteger estas camadas da reação de PCR misturam, e a introdução não resolvida longstanding de regiões expostas do metal na microplaqueta de PCR-CE tendo por resultado o electrolysis da formação da água e da bolha sempre que uma tensão é aplicada. Os ensinos instantâneos empregam calefatores externos e os thermocouples e, como esta'n, aliviaram muitos destes problemas. Os calefatores e os thermocouples podem ainda ser película fina depositada após a ligação da microplaqueta que permite fácil escalam-acima aos dispositivos multichannel. Além, o deposition direto destes componentes da microplaqueta segura o contato térmico bom com o reator de PCR.