A method is disclosed for producing a modified eukaryotic cytoplasmic DNA virus by direct molecular cloning of a modified DNA molecule comprising a modified cytoplasmic DNA virus genome. The inventive method comprises the steps of (I) modifying under extracellular conditions a DNA molecule comprising a first cytoplasmic DNA virus genome to produce a modified DNA molecule comprising the modified cytoplasmic DNA virus genome; (II) introducing the modified DNA molecule into a first host cell which packages the modified DNA molecule into infectious virions; and (III) recovering from the host cell virions comprised of the modified viral genome. The host cell is infected with a helper virus which is expressed to package the modified viral genome into infectious virions. Examples of packaging a modified poxvirus genome by a helper poxvirus of the same or different genus are described. Also disclosed are novel poxvirus vectors for direct molecular cloning of open reading frames into a restriction enzyme cleavage site that is unique in the vector. In one model poxvirus vector, the open reading frame is transcribed by a promoter located in the vector DNA upstream of a multiple cloning site comprised of several unique cleavage sites.

Un método es divulgado para producir un virus citoplásmico eukaryotic modificado de la DNA por la reproducción molecular directa de una molécula modificada de la DNA que abarca un genoma citoplásmico modificado del virus de la DNA. El método inventivo abarca los pasos (i) que modifican bajo de condiciones extracelulares una molécula de la DNA que abarca un primer genoma citoplásmico del virus de la DNA para producir una molécula modificada de la DNA que abarca el genoma citoplásmico modificado del virus de la DNA; (ii) introduciendo la molécula modificada de la DNA en una primera célula huesped que empaqueta la molécula modificada de la DNA en virions infecciosos; y (iii) recuperándose de los virions de la célula huesped abarcados del genoma viral modificado. La célula huesped se infecta con un virus del ayudante que se exprese al paquete el genoma viral modificado en virions infecciosos. Los ejemplos de empaquetar un genoma modificado del poxvirus por un poxvirus del ayudante del mismo o del diverso género se describen. También se divulgan los vectores del poxvirus de la novela para la reproducción molecular directa de los bastidores abiertos de la lectura en un sitio de la hendidura de la enzima de la restricción que sea único en el vector. En un vector modelo del poxvirus, el marco abierto de la lectura es transcrito por un promotor situado en la DNA del vector contracorriente desde un sitio múltiple de la reproducción abarcado de varios sitios únicos de la hendidura.