Provided herein is a nucleotide sequence encoding an Arg-specific
gingipain, said Arg-gingipain characterized as having an apparent
molecular mass of 50 kDa as estimated by sodium dodecyl sulfate
polyacrylamide gel electrophoresis and an apparent molecular mass of 44
kDa as estimated by gel filtration chromatography, said gingipain-1 having
amidolytic and proteolytic activity for cleavage after arginine residues
and having no amidolytic and/or proteolytic activity for cleavage after
lysine residues, wherein the amidolytic and/or proteolytic activity is
inhibited by cysteine protease group-specific inhibitors including
iodoacetamide, iodoacetic acid, N-ethylmaleimide, leupeptin, antipain,
trans-epoxysuccinyl-L-leucylamido-(4-guanidino)butane, TLCK, TPCK,
p-aminobenzamidine, N-chlorosuccinamide, and chelating agents including
EDTA and EGTA, wherein the amidolytic and/or proteolytic activity of said
gingipain-1 is not sensitive to inhibition by human cystatin C,
.alpha.2-macroglobulin, .alpha.1-proteinase inhibitor, antithrombin III,
.alpha.2-antiplasmin, serine protease group-specific inhibitors including
diisopropylfluorophosphate, phenylmethyl sulfonylfluoride and proteolytic
activities of ginigipan-1 are stabilized by Ca.sup.2+ and
3,4-diisochlorocoumarin, and wherein the amidolytic and/or wherein the
amidolytic and/or proteolytic activities of said gingipain-1 are
stimulated by glycine-containing peptides and glycine analogues, and
methods for preparation. As specifically exemplified, high and low
molecular weight forms of Arg-gingipains and sequences encoding them are
prepared from Porphyromonas gingivalis. Said high molecular weight
Arg-gingipain comprises a proteolytic component as described hereinabove
and at least one hemagglutinin component.
Se qui è una sequenza del nucleotide che mette un gingipain in codice di Arg-specifico, ad esempio Arg-gingipain caratterizzato come avendo una massa molecolare apparente di kDa 50 come valutata tramite l'elettroforesi del gel di poliacrilammide del solfato dodecilico di sodio e una massa molecolare apparente di kDa 44 come valutata dalla cromatografia di cromatografia d'esclusione, ad esempio gingipain-1 che ha attività amidolytic e proteolitica per fenditura dopo i residui dell'arginina e che non ha attività amidolytic e/o proteolitica per fenditura dopo i residui della lisina, in cui l'attività amidolytic e/o proteolitica è inibita dagli inibitori della proteasi group-specifico della cisteina compreso iodoacetammide, acido iodoacetico, N-ethylmaleimide, il leupeptin, il antipain, trans-epoxysuccinyl-L-leucylamido-(4-guanidino)butane, TLCK, TPCK, il p-aminobenzamidine, N-chlorosuccinamide e gli agenti di chelazione compreso l'EDTA ed EGTA, in cui il amidolytic e/o proteolitico l'attività di gingipain-1 detto non è sensibile ad inibizione dal cystatin umano C, alpha.2-macroglobulina, inibitore della alpha.1-proteinasi, antithrombin III, alpha.2-antiplasmin, inibitori della proteasi group-specifico della serina compreso diisopropylfluorophosphate, il sulfonylfluoride di phenylmethyl e le attività proteolitiche di ginigipan-1 sono stabilizzati da Ca.sup.2+ e da 3,4-diisochlorocoumarin ed in cui il amidolytic e/o in cui le attività amidolytic e/o proteolitiche di gingipain-1 detto sono stimolate dai peptidi glicina-contenenti e dagli analoghi della glicina e metodi per la preparazione. Come specificamente esemplificato, gli alti e formulari a basso peso molecolare del peso di Arg-gingipains e delle sequenze che li mettono in codice sono preparare dai gingivalis di Porphyromonas. L'alto peso molecolare detto Arg-gingipain contiene un componente proteolitico come descritto qui sopra ed almeno un componente del hemagglutinin.