Disclosed are reagents and a method for efficient in vitro molecular cloning of nucleic acid molecules of interest. Because the method is entirely in vitro, it can be automated and scaled-up in ways that are not possible in cell-based molecular cloning. The method involves insertion of a nucleic acid molecule of interest in a linear vector to form a circular vector where one strand is continuous and the other strand is discontinuous. The continuous strand of the circular vector is then amplified by rolling circle replication, amplifying the inserted nucleic acid molecule in the process. The amplification is rapid and efficient since it involves a single, isothermic reaction that replicates the vector sequences exponentially. The amplification process is amenable to automation where multiple reactions are carried out simultaneously in a small area. The amplified nucleic acid can be used for any purpose and in any manner that nucleic acid cloned or amplified by known methods can be used. This includes sequencing, probing, restriction analysis, subcloning, transcription, hybridization or denaturation analysis, further amplified, and storage for future use or analysis.

Gegeben Reagenzien und eine Methode für leistungsfähiges molekulares in-vitroklonen der Nukleinsäuremoleküle des Interesses frei. Weil die Methode völlig in-vitro ist, kann sie in den Weisen automatisiert werden und eingestuft werden-oben, die nicht im auf Zellenbasis molekularen Klonen möglich sind. Die Methode bezieht Einfügung eines Nukleinsäuremoleküls des Interesses an einem linearen Vektor, einen kreisförmigen Vektor zu bilden mit ein, in dem eine Faser ununterbrochen ist und die andere Faser unterbrochen ist. Die ununterbrochene Faser des kreisförmigen Vektors wird dann verstärkt, indem man die Kreisreproduktion rollt und das eingesetzte Nukleinsäuremolekül im Prozeß verstärkt. Die Verstärkung ist schnell und leistungsfähig, da sie eine einzelne miteinbezieht, Isothermreaktion, die den Vektor wiederholt, ordnet exponential der Reihe nach. Der Verstärkung Prozeß ist Automatisierung zugänglich, in der mehrfache Reaktionen gleichzeitig in einem kleinen Bereich durchgeführt werden. Die verstärkte Nukleinsäure kann für jeden möglichen Zweck benutzt werden und in irgendeiner Weise, die Nukleinsäure durch bekannte Methoden klonte oder verstärkte, kann verwendet werden. Dieses schließt das Der Reihe nach ordnen, das Prüfen, Beschränkung Analyse, das Subcloning, Übertragung, die Hybridation- oder Denaturierunganalyse ein, weiter verstärkt und Ablage für zukünftigen Gebrauch oder Analyse.