A method for making insertional mutations at random or quasi-random
locations in the chromosomal or extra-chromosomal nucleic acid of a target
cell includes the step of combining, in the target cell, cellular nucleic
acid with a synaptic complex that comprises (a) a transposase protein and
(b) a polynucleotide that comprises (1) a pair of nucleotide sequences
adapted for operably interacting with Tn5 transposase and (2) a
transposable nucleotide sequence therebetween, under conditions that
mediate transpositions into the cellular DNA. In the method, the synaptic
complex is formed in vitro under conditions that disfavor or prevent the
synaptic complexes from undergoing productive transposition.
Μια μέθοδος για τις μεταλλαγές insertional τυχαία ή τις σχεδόν-τυχαίες θέσεις στο χρωμοσωμικό ή εξωχρωμοσωμικό νουκλεϊνικό οξύ ενός κυττάρου στόχων περιλαμβάνει το βήμα του συνδυασμού, στο κύτταρο στόχων, του κυψελοειδούς νουκλεϊνικού οξέος με ένα συναπτικό συγκρότημα που περιλαμβάνει (α) μια transposase πρωτεϊ'νη και (β) polynucleotide που περιλαμβάνει (1) ένα ζευγάρι των ακολουθιών νουκλεοτίδας που προσαρμόζονται για operably να αλληλεπιδράσει με Tn5 transposase και (2) μια μετατρέψιμη ακολουθία νουκλεοτίδας, υπό τους όρους που μεσολαβούν τις μεταθέσεις στο κυψελοειδές DNA. Στη μέθοδο, το συναπτικό συγκρότημα διαμορφώνεται in vitro υπό τους όρους που αποδοκιμάζουν ή αποτρέπουν τα συναπτικά συγκροτήματα από να υποβληθούν στην παραγωγική μετάθεση.