The present invention provides a method and apparatus for automated DNA
sequencing. The method of the invention includes the steps of: a) using a
processive exonuclease to cleave from a single DNA strand the next
available single nucleotide on the strand; b) transporting the single
nucleotide away from the DNA strand; c) incorporating the single
nucleotide in a fluorescence-enhancing matrix; d) irradiating the single
nucleotide to cause it to fluoresce; e) detecting the fluorescence; f)
identifying the single nucleotide by its fluorescence; and g) repeating
steps a) to f) indefinitely (e.g., until the DNA strand is fully cleaved
or until a desired length of the DNA is sequenced). The apparatus of the
invention includes a cleaving station for the extraction of DNA from cells
and the separation of single nucleotides from the DNA; a transport system
to separate the single nucleotide from the DNA and incorporate the single
nucleotide in a fluorescence-enhancing matrix; and a detection station for
the irradiation, detection and identification of the single nucleotides.
The nucleotides are advantageously detected by irradiating the nucleotides
with a laser to stimulate their natural fluorescence, detecting the
fluorescence spectrum and matching the detected spectrum with that
previously recorded for the four nucleotides in order to identify the
specific nucleotide.
La presente invenzione fornisce un metodo e un apparecchio per ordinare automatizzato del DNA. Il metodo dell'invenzione include i punti di: a) usando un exonuclease processive per fendersi da un singolo DNA incaglia il singolo nucleotide disponibile seguente sul filo; b) trasportando il singolo nucleotide via dal filo del DNA; c) incorporare il singolo nucleotide in una tabella d'aumento; d) irradiare il singolo nucleotide per indurlo ad essere flourescente; e) rilevare fluorescenza; f) che identifica il singolo nucleotide per la relativa fluorescenza; e g) che ripete indefinitamente i punti a) alla f) (per esempio, fino a fendere il filo del DNA completamente o fino ad ordinare una lunghezza in serie voluta del DNA). L'apparecchio dell'invenzione include una stazione di fenditura per l'estrazione di DNA dalle cellule e la separazione di singoli nucleotidi dal DNA; un sistema di trasporto per separare il singolo nucleotide dal DNA e per incorporare il singolo nucleotide in una tabella d'aumento; e una stazione di rilevazione per l'irradiazione, la rilevazione e l'identificazione di singoli nucleotidi. I nucleotidi sono rilevati vantaggiosamente irradiando i nucleotidi con un laser per stimolare la loro fluorescenza naturale, rilevante lo spettro di fluorescenza ed abbinante lo spettro rilevato con quella precedentemente registrata per i quattro nucleotidi per identificare il nucleotide specifico.