Purified enzymatic compositions are provided having alpha-amidating enzymes
capable of catalyzing the conversion of a peptidyl compound having a
C-terminal glycine residue to a corresponding peptidyl amide having an
amino group in place of the C-terminal glycine. The purified compositions
have specific activities above 25 mU per mg protein and are sufficiently
free of proteases to allow effective catalysis of even peptidyl compounds
having L-amino acids. Biologically important alpha-amidated products such
as calcitonin and other regulatory hormones are efficiently produced using
the alpha-amidation reaction catalyzed by the enzymes. Purification by
size exclusion chromatography in combination with strong anion exchange
chromatography results in homogeneous enzyme species which are used to
prepare antibodies specific for the alpha-amidating enzyme. A gene capable
of expressing the alpha-amidating enzyme is ligated into an expression
vector and transformed into a host cell capable of expressing the gene.
Οι καθαρισμένες ενζυματικές συνθέσεις παρέχονται έχοντας τα άλφα- amidating ένζυμα ικανά τη μετατροπή μιας peptidyl ένωσης που έχει ένα γ-τελικό υπόλειμμα γλυκίνης σε ένα αντίστοιχο peptidyl αμίδιο που έχει μια αμινο ομάδα αντί της γ-τελικής γλυκίνης. Οι καθαρισμένες συνθέσεις αναπτύσσουν τις συγκεκριμένες δραστηριότητες επάνω από 25 mU ανά πρωτεϊ'νη mg και είναι αρκετά χωρίς πρωτεάσεις να επιτρέψουν την αποτελεσματική κατάλυση ακόμη και των peptidyl ενώσεων που έχουν τα λ-αμινο οξέα. Τα βιολογικά σημαντικά άλφα-αμιδούχα προϊόντα όπως calcitonin και άλλες ρυθμιστικές ορμόνες παράγονται αποτελεσματικά χρησιμοποιώντας την αντίδραση άλφα- amidation που καταλύεται από τα ένζυμα. Ο καθαρισμός από τη χρωματογραφία αποκλεισμού μεγέθους σε συνδυασμό με την ισχυρή χρωματογραφία ανταλλαγής ανιόντων οδηγεί στα ομοιογενή ενζυμικά είδη που χρησιμοποιούνται για να προετοιμάσουν τα αντισώματα συγκεκριμένα για το άλφα- amidating ένζυμο. Ένα γονίδιο ικανό το άλφα- amidating ένζυμο επιδένεται σε ένα διάνυσμα έκφρασης και μετασχηματίζεται σε ένα κύτταρο οικοδεσποτών ικανό το γονίδιο.
