Oligonucleotides and other biomolecules are immobilized in high density on
solid substrates through covalent forces using either a permanent
thioether bond, or a chemoselectively reversible disulfide bond to a
surface thiol. Substrates which have hydroxyl groups on their surfaces can
be first silanized with a trichlorosilane containing 2-20 carbon atoms in
its hydrocarbon backbone, terminating in a protected thiol group. The
oligonucleotides or other biomolecules are first connected to a tether
consisting of a hydrocarbon or polyether chain of 2-20 units in length
which terminates in a thiol group. This thiol may be further modified with
a halobenzylic-bifunctional water soluble reagent which allows the
conjugate to be immobilized onto the surface thiol group by a permanent
thioether bond. Alternatively, the oligonucleotide-tether-thiol group can
be converted to a pyridyldisulfide functionality which attaches to the
surface thiol by a chemoselectively reversible disulfide bond. The
permanently bound oligonucleotides are immobilized in high density
compared to other types of thiol functionalized silane surfaces and to the
avidin-biotin method.
Los oligonucleotides y otras biomoléculas se inmovilizan en alta densidad en los substratos sólidos a través de fuerzas covalentes usando cualquiera un enlace permanente del thioether, o un enlace de disulfuro chemoselectively reversible a un thiol superficial. Los substratos que tienen grupos del oxhidrilo en sus superficies pueden estar primero silanized con un trichlorosilane que contiene 2-20 átomos de carbón en su espina dorsal del hidrocarburo, terminando en un grupo de thiol protegido. Los oligonucleotides u otras biomoléculas primero están conectados con un atar que consiste en una cadena del hidrocarburo o del polyether de 2-20 unidades en la longitud que termina en un grupo de thiol. Este thiol se puede modificar más a fondo con un reactivo soluble en agua del halobenzylic-bifunctional que permita que la conjugación sea inmovilizada sobre el grupo de thiol superficial por un enlace permanente del thioether. Alternativomente, el grupo del oligonucleotide-atar-oligonucleotide-tether-thiol se puede convertir a una funcionalidad del pyridyldisulfide que una al thiol superficial por un enlace de disulfuro chemoselectively reversible. Los oligonucleotides permanentemente limitados se inmovilizan en la alta densidad comparada a otros tipos de thiol functionalized superficies del silane y al método del avidin-avidin-biotin.