The present disclosure provides DNA constructs, genetically modified host cells and methods for identifying inhibitors of proteolysis of membrane-associated protease substrates including, but not limited to, amyloid precursor protein, a Notch protein and sterol response element binding proteins. The methods rely on chimeric proteolytic substrates containing a portion of the proteolytic substrate protein (including the proteolytic cleavage site) and a transcription repressor protein portion. Release of the repressor results in blockage of the transcription of a chimeric reporter gene which includes repressor-responsive transcription regulatory sequences and a reporter protein coding region. A specific protease inhibitor is identified by increased reporter protein activity.

Η παρούσα κοινοποίηση παρέχει τα κατασκευάσματα DNA, γενετικά τροποποιημένα κύτταρα οικοδεσποτών και μέθοδοι για τους ανασταλτικούς παράγοντες proteolysis των μεμβράνη-συνδεμένων υποστρωμάτων πρωτεάσεων συμπεριλαμβανομένου, αλλά μην περιορισμένος, amyloid πρωτεϊ'νη προδρόμων, σε ένα στοιχείο απάντησης πρωτεϊ'νης εγκοπών και στερόλης δεσμευτικές πρωτεϊ'νες. Οι μέθοδοι στηρίζονται στα ουτοπικά proteolytic υποστρώματα που περιέχουν μια μερίδα της proteolytic πρωτεϊ'νης υποστρωμάτων (συμπεριλαμβανομένης της proteolytic περιοχής σχισίματος) και μια repressor μεταγραφής πρωτεϊνική μερίδα. Η απελευθέρωση repressor οδηγεί στην παρεμπόδιση της μεταγραφής ενός ουτοπικού γονιδίου δημοσιογράφων που περιλαμβάνει τις ρεπρεσσορ-απαντητικές ρυθμιστικές ακολουθίες μεταγραφής και μια πρωτεϊνική περιοχή κωδικοποίησης δημοσιογράφων. Ένας συγκεκριμένος ανασταλτικός παράγοντας πρωτεάσεων προσδιορίζεται από την αυξανόμενη πρωτεϊνική δραστηριότητα δημοσιογράφων.