Disclosed are compositions and a method for of amplifying nucleic acid sequences useful for detecting the presence of molecules of interest. The method is useful for detecting specific nucleic acids in a sample with high specificity and sensitivity. The method also has an inherently low level of background signal. A preferred form of the method consists of a DNA ligation operation, an amplification operation, and a detection operation. The DNA ligation operation circularizes a specially designed nucleic acid probe molecule. This operation is dependent on hybridization of the probe to a target sequence and forms circular probe molecules in proportion to the amount of target sequence present in a sample. The amplification operation is rolling circle replication of the circularized probe. A single round of amplification using rolling circle replication results in a large amplification of the circularized probe sequences. Following rolling circle replication, the amplified probe sequences are detected and quantified using any of the conventional detection systems for nucleic acids such as detection of fluorescent labels, enzyme-linked detection systems, antibody-mediated label detection, and detection of radioactive labels. Because, the amplified product is directly proportional to the amount of target sequence present in a sample, quantitative measurements reliably represent the amount of a target sequence in a sample. Major advantages of this method are that the ligation step can be manipulated to obtain allelic discrimination, the DNA replication step is isothermal, and signals are strictly quantitative because the amplification reaction is linear and is catalyzed by a highly processive enzyme. In multiplex assays, the primer oligonucleotide used for the DNA polymerase reaction can be the same for all probes. Also described are modes of the method in which additional amplification is obtained using a cascade of strand displacement reactions.

Gegeben Aufbau und eine Methode für die Verstärkung der Nukleinsäurereihenfolgen frei, die für das Ermitteln des Vorhandenseins der Moleküle des Interesses nützlich sind. Die Methode ist für das Ermitteln der spezifischen Nukleinsäuren in einer Probe mit hoher Besonderheit und Empfindlichkeit nützlich. Die Methode hat auch ein in sich selbst niedriges Niveau des Hintergrundsignals. Eine bevorzugte Form der Methode besteht aus einem DNA Verbindungbetrieb, einem Verstärkung Betrieb und einem Abfragung Betrieb. Der DNA Verbindungbetrieb circularizes ein besonders entworfenes Nukleinsäureprüfspitze Molekül. Dieser Betrieb ist von der Hybridation der Prüfspitze zu einer Zielreihenfolge abhängig und ordnen kreisförmige Moleküle Prüfspitze der Formen im Verhaeltnis zu der Menge des Ziels Geschenk in einer Probe der Reihe nach. Der Verstärkung Betrieb ist Rollenkreisreproduktion von circularized Prüfspitze. Ein einzelner Umlauf der Verstärkung Rollenkreis-Reproduktionresultate in einer großen Verstärkung von verwendend circularized Prüfspitze Reihenfolgen. Nach Rollenkreisreproduktion werden die verstärkten Prüfspitze Reihenfolgen mit irgendwelchen der herkömmlichen Abfragung Systeme für Nukleinsäuren wie Abfragung der Leuchtstoffaufkleber, der Enzym-verbundenen Abfragung Systeme, der Antikörper-vermittelten Aufkleberabfragung und der Abfragung der radioaktiven Aufkleber ermittelt und quantitativ bestimmt. Weil, das verstärkte Produkt direkt zur Menge der Zielreihenfolge vorhanden in einer Probe proportional ist, stellen quantitative Maße zuverlässig die Menge einer Zielreihenfolge in einer Probe dar. Hauptvorteile dieser Methode sind, daß der Verbindungschritt manipuliert werden kann, um allelic Unterscheidung zu erreichen, der DNA Reproduktionschritt ist Isothermal, und Signale sind ausschließlich quantitativ, weil die Verstärkung Reaktion linear ist und durch ein in hohem Grade processive Enzym katalysiert wird. In den Multiplexproben kann der besser gekleidetere Oligonucleotide, der für die DNA Polymerasereaktion benutzt wird, derselbe für alle Prüfspitzen sein. Auch beschrieben Modi der Methode, in der zusätzliche Verstärkung mit einer Kaskade der Faserversetzung Reaktionen erreicht wird.