Disclosed is a method wherein an unknown DNA sequence 3' to a known DNA
sequence is amplified specifically in a first round of PCR using a
5'-blocked primer which hybridizes to the known portion of the DNA
sequence. The resultant population of complementary strands to the unknown
region is melted to yield single-stranded DNA molecules which are
complementary to the unknown DNA sequence, but having a known 5' terminal
sequence which is blocked to further reaction. The single-stranded DNA
molecules are coupled at their 3' termini to an arbitrary, 3'-blocked
synthetic primer of known sequence to yield single-stranded DNA target
molecules having a known sequence at both the 5' and 3' termini and an
unknown sequence therebetween. Amplification of the DNA target molecules,
using primers complementary to the known 5' and 3' termini, causes
specific amplification of the unknown DNA between the 5' and 3' termini of
the DNA target molecules. The amplified DNA target molecules can be
sequenced or otherwise manipulated using standard methods.
É divulgado um método wherein uma seqüência desconhecida 3' do DNA a uma seqüência sabida do DNA é amplificada especificamente em um primeiro círculo de PCR usando um primer 5'-blocked que hybridizes à parcela sabida da seqüência do DNA. A população resultante de costas complementares à região desconhecida é derretida para render as moléculas único-encalhadas do DNA que são complementares à seqüência desconhecida do DNA, mas ter uma seqüência 5' terminal sabida que seja obstruída a uma reação mais adicional. As moléculas único-encalhadas do DNA são acopladas em seus 3' términos a um arbitrário, primer 3'-blocked sintético da seqüência sabida para render as moléculas único-encalhadas do alvo do DNA que têm uma seqüência sabida no 5' e os términos 3' e uma seqüência desconhecida therebetween. O amplification das moléculas do alvo do DNA, usando os primers complementares aos términos 5' e 3' conhecidos, o amplification específico das causas do DNA desconhecido entre o 5' e os términos 3' do DNA alvejam moléculas. As moléculas amplificadas do alvo do DNA podem ser arranjadas em seqüência ou de outra maneira manipulado usando métodos padrão.
