A method of selecting and growing pluripotential embryonic stem cells
isolated from an ungulate species blastocysts of embryos that develop by
way of an embryonic disc is disclosed. The method comprises growing
blastocysts in tissue culture growth medium which includes both
heat-inactivated new born calf serum and heat-inactivated fetal calf
serum; disaggregating the blastocysts either after spontaneous hatching or
after mechanical removal of the zone pellucida; growing stem cell colonies
from the disaggregated cells in issue culture growth medium; selecting
stem cell colonies by morphological characteristics; and growing the
selected stem cells in tissue culture growth medium. The cells are round
cells, tightly packed with large nuclei in relation to cytoplasm, and
fairly prominent nucleoli. They grow in tightly adherent coloedes and as
the colonies get larger the cells tend to flatten out in the center of the
colony. The outer, less flattened cells of a larger colony or all the
cells of a smaller colony without central flattening are readily
disaggregated by trypsinization into small spherical cells which have a
bright phase contrast appearance, and if observed after a short time of
incubation at 37.degree. C. they show lobular pseudopodia.
Une méthode de choisir et d'accroître les cellules de tige embryonnaires pluripotential d'isolement des blastocysts d'espèces d'un ungulate des embryons qui se développent par un disque embryonnaire est révélée. La méthode comporte les blastocysts croissants dans le milieu de croissance de culture de tissu qui inclut le sérum nouveau-né chaleur-inactivé de veau et le sérum foetal chaleur-inactivé de veau ; désagrégeant les blastocysts après la hachure spontanée ou après le déplacement mécanique du pellucida de zone ; les colonies croissantes de cellules de tige des cellules désagrégées dans l'issue cultivent le milieu de croissance ; choix des colonies de cellules de tige par des caractéristiques morphologiques ; et accroissant la tige choisie les cellules dans le tissu cultivent le milieu de croissance. Les cellules sont les cellules rondes, étroitement emballées avec de grands noyaux par rapport au cytoplasme, et les nucleoli assez en avant. Elles se développent dans les coloedes étroitement adhérents et pendant que les colonies deviennent plus grandes les cellules tendent à aplatir dehors au centre de la colonie. Les externes, moins de cellules aplaties d'une plus grande colonie ou toutes les cellules d'une plus petite colonie sans aplatissement central sont aisément désagrégés par trypsinization dans les petites cellules sphériques qui ont un aspect lumineux de contraste de phase, et si observé après peu de temps d'incubation à 37.degree. C. ils montrent les pseudopodia lobulaires.