The invention establishes that coffee fruit ripening is climacteric. The
invention further provides techniques to isolate substantially pure RNA
from coffee fruit even though the fruit contains high levels of phenolic
compounds and carbohydrate which would otherwise interfere with obtaining
clean RNA preparations from this tissue. The invention provides purified
proteins, nucleic acid sequences that code on expression therefore and
recombinant DNA molecules, including hosts transformed therewith, and
methods for transforming coffee plants to suppress the expression of
coffee fruit-expressed ACC synthase and/or coffee fruit-expressed ACC
oxidase necessary for ethylene biosynthesis and the ripening of coffee
fruit. Coffee plants are transformed with vectors containing coffee
fruit-expressed ACC synthase and/or with ACC oxidase DNA sequences that
code on expression for the respective RNA that is antisense or sense to
the mRNA for the respective ACC synthase and/or ACC oxidase. The result is
that the expression of the respective enzyme is eliminated and the
transformed plants are incapable of synthesizing ethylene during coffee
fruit ripening, although other aspects of their metabolism is not
affected. The invention further provides methods for controlling the
ripening of coffee fruit from the transformed coffee plants by applying
exogenous ethylene.
L'invention établit que la maturation du fruit de café est climatérique. L'invention autre fournit des techniques pour isoler l'ARN essentiellement pur du fruit de café quoique le fruit contienne les niveaux élevés des composés phénoliques et de l'hydrate de carbone qui interféreraient autrement obtenir les préparations propres d'ARN à partir de ce tissu. L'invention fournit les protéines épurées, les ordres d'acide nucléique qui codent sur l'expression donc et les molécules de recombinaison d'ADN, y compris des centres serveurs transformés en conséquence, et les méthodes pour transformer des usines de café pour supprimer l'expression du synthase d'ACCUMULATEUR fruit-exprimé par café et/ou de l'oxydase d'ACCUMULATEUR fruit-exprimée par café nécessaires pour la biosynthèse d'éthylène et la maturation du fruit de café. Des usines de café sont transformées avec des vecteurs contenant le synthase d'ACCUMULATEUR fruit-exprimé par café et/ou avec les ordres d'ADN d'oxydase d'ACCUMULATEUR qui codent sur l'expression pour l'ARN respectif qui est antisense ou sens au mRNA pour le synthase d'ACCUMULATEUR et/ou l'oxydase respectifs d'ACCUMULATEUR. Le résultat est que l'expression de l'enzyme respective est éliminée et les usines transformées sont incapables de synthétiser l'éthylène pendant la maturation du fruit de café, bien que d'autres aspects de leur métabolisme ne soit pas affectés. L'invention autre fournit des méthodes pour commander la maturation du fruit de café des usines transformées de café en appliquant l'éthylène exogène.