Methods for the production of purified, catalytically active, recombinant memapsin 2 have been developed. The substrate and subsite specificity of the catalytically active enzyme have been determined. The substrate and subsite specificity information was used to design substrate analogs of the natural memapsin 2 substrate that can inhibit the function of memapsin 2. The substrate analogs are based on peptide sequences, shown to be related to the natural peptide substrates for memapsin 2. The substrate analogs contain at least one analog of an amide bond which is not capable of being cleaved by memapsin 2. Processes for the synthesis of two substrate analogues including isosteres at the sites of the critical amino acid residues were developed and the substrate analogues, OMR99-1 and OM99-2, were synthesized. OM99-2 is based on an octapeptide Glu-Val-Asn-Leu-Ala-Ala-Glu-Phe (SEQ ID NO:28) with the Leu-Ala peptide bond substituted by a transition-state isostere hydroxyethylene group (FIG. 1). The inhibition constant of OM99-2 is 1.6.times.10.sup.-9 M against recombinant pro-memapsin 2. Crystallography of memapsin 2 bound to this inhibitor was used to determine the three dimensional structure of the protein, as well as the importance of the various residues in binding. This information can be used by those skilled in the art to design new inhibitors, using commercially available software programs and techniques familiar to those in organic chemistry and enzymology, to design new inhibitors to memapsin 2, useful in diagnostics and for the treatment and/or prevention of Alzheimer's disease.

Methoden für die Produktion gereinigten, katalytisch aktiven, recombinant memapsin 2 sind entwickelt worden. Die Substrat- und subsitebesonderheit des katalytisch aktiven Enzyms sind festgestellt worden. Das Substrat und die subsite Besonderheitinformationen wurden benutzt, um Substratentsprechungen des natürlichen memapsin 2 Substrates zu entwerfen, das die Funktion von memapsin 2. hemmen, welche kann die Substratentsprechungen auf den Peptidreihenfolgen basieren, gezeigt, mit den natürlichen Peptidsubstraten für memapsin 2 zusammenzuhängen. Die Substratentsprechungen enthalten mindestens eine Entsprechung einer Amidbindung, die nicht zu durch memapsin 2 zerspaltet werden fähig ist. Prozesse für die Synthese von zwei Substratentsprechungen einschließlich isosteres an den Aufstellungsorten der kritischen Aminosäureüberreste wurden entwickelt und die Substratentsprechungen, OMR99-1 und OM99-2, wurden synthetisiert. OM99-2 basiert auf einem octapeptide Glu-Val-Asn-Leu-Ala-Glu-Val-Asn-Leu-Ala-Ala-Glu-Phe-Glu-Phe (FOLGENDE Identifikation NO:28) mit der Leu-Leu-Alapeptidbindung, die durch eine Übergang-Zustand isostere hydroxyethylene Gruppe ersetzt wird (FIG. 1). Die Hemmungkonstante von OM99-2 ist 1.6.times.10.sup.-9 M gegen recombinant Pro-memapsin 2. Kristallographie memapsin 2 der Grenze zu diesem Hemmnis wurde verwendet, um die dreidimensionale Struktur des Proteins, sowie den Wert der verschiedenen Überreste beim Binden festzustellen. Diese Informationen können von den Fachleuten verwendet werden, um neue Hemmnisse mit im Handel erhältlichen Software-Programmen und -techniken zu entwerfen, die zu denen in der organischen Chemie und in der Enzymologie, neue Hemmnisse zum memapsin 2 zu entwerfen vertraut sind, nützlich in der Diagnose und für die Behandlung und/oder die Verhinderung von Krankheit Alzheimers.