This invention provides methods and compositions for producing high titer, substantially purified preparations of recombinant adeno-associated virus (AAV) that can be used as vectors for gene delivery. At the onset of vector production, AAV producer cells of this invention typically comprise one or more AAV packaging genes, an AAV vector comprising a heterologous (i.e. non-AAV) transgene of interest, and a helper virus such as an adenovirus. The AAV vector preparations produced are generally replication incompetent but are capable of mediating delivery of a transgene of interest (such as a therapeutic gene) to any of a wide variety of tissues and cells. The AAV vector preparations produced according to this invention are also substantially free of helper virus as well as helper viral and cellular proteins and other contaminants. The invention described herein provides methods of producing rAAV particles by culturing producer cells under conditions, such as temperature and pH, that promote release of virus. Also provided is a quantitative, high-throughput assay useful in the assessment of viral infectivity and replication, as well as in the screening of agent that affect viral infectivity and/or replication.

Esta invenção fornece métodos e composições produzindo o titer elevado, as preparações substancialmente purified do vírus adeno-associado recombinant (AAV) que podem ser usadas como vetores para a entrega do gene. No início da produção do vetor, as pilhas do produtor de AAV desta invenção compreendem tipicamente um ou mais genes empacotando de AAV, um vetor de AAV que compreendem (um transgene heterologous isto é do non-AAV) do interesse, e um vírus do ajudante tal como um adenovírus. As preparações do vetor de AAV produzidas são geralmente replication incompetent mas são capazes de mediar a entrega de um transgene do interesse (tal como um gene therapeutic) a alguma de uma variedade larga dos tecidos e das pilhas. As preparações do vetor de AAV produzidas de acordo com esta invenção estão também substancialmente livres do vírus do ajudante as.well.as proteínas viral e celulares do ajudante e outros contaminadores. A invenção descrita nisto fornece métodos de produzir partículas do rAAV cultivando pilhas do produtor sob as condições, tais como a temperatura e o pH, que promovem a liberação do vírus. São fornecidos também um assay quantitative, do elevado-high-throughput útil na avaliação do infectivity viral e um replication, as.well.as na seleção do agente que afeta o infectivity e/ou o replication viral.