Maize tissue may be regenerated from nodal extracts prepared from
germinated mature seeds and germinated embryos grown in a medium
containing plant growth regulators. Nodal section explants are secured
from seedlings approximately 3-10 days old, preferably from 3-7 days old.
The explants are grown on an induction medium until adventitious shoot
formation is observed. The shoots are separated and elongated on an
MS-based medium, and then rooted. Fast genotype-independent regeneration
is obtained, in 12-14 weeks. These explants, as well as zygotic embryos,
may be transformed with exogenous DNA using a biolistic approach, where
DNA precipitated onto tungsten microprojectiles is accelerated at a
minimum of 650 psi towards the explants at a distance of at least 7.5 cm.
Improved frequency of transformation is obtained using microprojectiles
which prior to DNA precipitation were frozen in glycerol, and suspending
from a preparation of 2.5 M CaCl.sub.2. The combination of transformation
process and regeneration can be used, independent of genotype, to provide
new commercial crop organisms.
Ο ιστός αραβόσιτου μπορεί να αναπαραχθεί από τα κομβικά αποσπάσματα που προετοιμάζονται από τους βλαστημένους ώριμους σπόρους και τα βλαστημένα έμβρυα που αυξάνονται σε ένα μέσο που περιέχει τους ρυθμιστές αύξησης εγκαταστάσεων. Το κομβικό τμήμα explants εξασφαλίζεται από τα σπορόφυτα περίπου 3-10 ημέρες παλαιές, κατά προτίμηση από 3-7 ημέρες παλαιές. Τα explants αυξάνονται σε ένα μέσο επαγωγής έως ότου παρατηρείται ο τυχαίος σχηματισμός βλαστών. Οι βλαστοί είναι χωρισμένοι και επιμηκυμένοι σε ένα κα-βασισμένο μέσο, και έπειτα ριζοβολημένοι. Η γρήγορη γενότυπος-ανεξάρτητη αναγέννηση λαμβάνεται, σε 12-14 εβδομάδες. Αυτά τα explants, καθώς επίσης και τα zygotic έμβρυα, μπορούν να μετασχηματιστούν με το εξωγενές DNA χρησιμοποιώντας μια biolistic προσέγγιση, όπου το DNA που κατακρημνίζεται επάνω στο βολφράμιο microprojectiles επιταχύνεται σε ένα ελάχιστο 650 PSI προς τα explants σε μια απόσταση τουλάχιστον 7,5 εκατ.. Η βελτιωμένη συχνότητα του μετασχηματισμού είναι αποκτηθείσα χρησιμοποίηση microprojectiles που πριν από την πτώση DNA επάγωσαν στη γλυκερίνη, και την αναστολή από μια προετοιμασία 2,5 μ CaCl.sub.2. Ο συνδυασμός διαδικασίας και αναγέννησης μετασχηματισμού μπορεί να χρησιμοποιηθεί, ανεξάρτητος από το γενότυπο, για να παρέχει τους νέους εμπορικούς οργανισμούς συγκομιδών.