A universal folding method that has been demonstrated to be effective in refolding a variety of very different proteins expressed in bacteria as inclusion bodies has been developed. Representative proteins that can be dissolved and refolded in biologically active form, with the native structure, are shown in Table I. The method has two key steps to unfold and then refold the proteins expressed in the inclusion bodies. The first step is to raise the pH of the protein solution in the presence of denaturing agents to pH greater than 9, preferably 10. The protein solution may be maintained at the elevated pH for a period of up to about 24 hours, or the pH immediately decreased slowly, in increments of about 0.2 pH units/24 hours, until the solution reaches a pH of about 8.0, or both steps used. In the preferred embodiment, purified inclusion bodies are dissolved in 8 M urea, 0.1 M Tris, 1 mM glycine, 1 mM EDTA, 10 mM beta-mercaptoethanol, 10 mM dithiothreitol (DTT), 1 mM redued glutathion (GSH), 0.1 mM oxidized glutathion (GSSG), pH 10. The absorbance at 280 nm (OD280) of the protein solution is 5.0. This solution is rapidly diluted into 20 volumes of 20 mM Tris base. The resulting solutin is adjusted to pH 9.0 with 1 M HCl and is kept at 4.degree. C. for 24 hr. The pH is adjusted to pH 8.8 and the solution is kept at 4.degree. C. for another 24 hrs. This process is repeated until the pH is adjusted to 8.0. After 24 hr at pH 8.0, the refolded proteins can be concentrated by ultrafiltration and applied to a gel filtration column for purification.

Een universele het vouwen methode die om efficiënt is aangetoond te zijn in het refolding van een verscheidenheid van zeer verschillende proteïnen die in bacteriën wordt uitgedrukt aangezien de opnemingsorganismen is ontwikkeld. De representatieve proteïnen die kunnen worden opgelost en in biologisch actieve vorm, met de inheemse structuur refolded worden, getoond in Tabel 1. De methode heeft twee zeer belangrijke te openen stappen en toen refold de proteïnen die in de opnemingsorganismen worden uitgedrukt. De eerste stap is pH van de eiwitoplossing op te heffen in aanwezigheid van het denatureren van agenten aan pH groter dan 9, bij voorkeur 10. De eiwitoplossing kan bij opgeheven pH voor een periode worden gehandhaafd van tot ongeveer 24 uren, of pH, in toename van ongeveer 0,2 pH units/24 uren die onmiddellijk langzaam is verminderd, tot de oplossing pH van ongeveer 8,0 bereikt, of beide gebruikte stappen. In de aangewezen belichaming, worden de gezuiverde opnemingsorganismen opgelost in het ureum van 8 M, 0,1 M Tris, 1 mM glycine, 1 mM EDTA, 10 mM bèta-mercaptoethanol, mM dithiothreitol 10 (DTT), redued 1 mM glutathion (GSH), 0,1 mM geoxydeerde glutathion (GSSG), pH 10. De absorbering bij 280 NM (OD280) van de eiwitoplossing is 5,0. Deze oplossing is snel verdund in 20 volumes van 20 mM Tris basis. Het voortvloeien solutin wordt aangepast aan pH 9,0 met 1 M HCl en bij 4.degree. C. voor 24 u gehouden. PH wordt aangepast aan pH 8,8 en de oplossing wordt gehouden bij 4.degree. C. nog eens 24 u. Dit proces wordt herhaald tot pH aan 8,0 wordt aangepast. Na 24 u bij pH 8,0, refolded proteïnen kan door ultrafiltratie worden geconcentreerd en op een kolom van de gelfiltratie voor reiniging zijn van toepassing geweest.