A method is provided for producing a library of mutagenized polynucleotides from a target sequence comprising (a) taking a sample comprising: (i) a target sequence including a section to be mutagenized, (ii) a library of first primers where the first primers include a first fixed sequence and a first unknown sequence 3' to the first fixed sequence, the first unknown sequence varying within the library of first primers, and (iii) a library of second primers where the second primer include a second fixed sequence that differs from the first fixed sequence, and a second unknown sequence 3' to the second fixed sequence, the second unknown sequence varying within the library of second primers; (b) performing one or more cycles of primer extension amplification on the sample in the presence of at least one polymerase such that a member of the library of the first primers is extended relative to the target sequence; and (c) performing one or more additional cycles of primer extension amplification on the sample such that a member of the library of the second primers is extended relative to the first primer that was extended in step (b) to form the library of mutagenized polynucleotides. The mutagenesis produces a library of mutagenized targeted sequences with random truncations.

Um método é fornecido produzindo uma biblioteca de mutagenized polynucleotides de uma seqüência do alvo que compreende (a) fazendo exame de compreender da amostra: (i) uma seqüência do alvo including uma seção a ser mutagenized, (ii) uma biblioteca de primeiros primers onde os primeiros primers incluíssem uma primeira seqüência reparada e uma primeira seqüência desconhecida 3' à primeira seqüência reparada, a primeira seqüência desconhecida que varia dentro da biblioteca de primeiros primers, e (iii) uma biblioteca de segundos primers onde o segundo primer incluísse uma segunda seqüência reparada que diferisse da primeira seqüência reparada, e uma segunda seqüência desconhecida 3' à segunda seqüência reparada, a segunda seqüência desconhecida que varia dentro da biblioteca de segundos primers; (b) um executando ou mais ciclo do amplification mais mais bem vestido da extensão na amostra na presença ao menos de um polymerase tais que um membro da biblioteca dos primeiros primers é prolongado relativo à seqüência do alvo; e (c) um executando ou o mais ciclo adicional de um amplification mais mais bem vestido da extensão na amostra tais que um membro da biblioteca dos segundos primers é prolongado relativo ao primeiro primer de que foi estendido na etapa (b) ao formulário a biblioteca mutagenized polynucleotides. O mutagenesis produz uma biblioteca de mutagenized seqüências alvejadas com truncamentos aleatórios.