The present invention provides cell-based screening assays designed to
identify agents that regulate the activity of the polycystic kidney
disease proteins encoded by the PKD-1 and PKD-2 genes and that may be
useful in the treatment of polycystic kidney disease. The assays of the
invention comprise the contacting of genetically engineered cells
expressing a mutant or truncated PKD gene product with a test agent and
assaying for a decrease in the PKD mediated mutant phenotype.
Characteristics associated with such a mutant phenotype include increased
adherence to type I collagen coated surfaces; apical expression of
NaK-ATPase on the cell membrane; increased expression of
.beta.-2-NaK-ATPase; and decreased focal adhesion kinase (FAK)
incorporation into focal adhesion complexes, and inability to form tubular
structures in a gel matrix. To facilitate the screening methods of the
invention, cells may be genetically engineered to express epitope tagged
PKD gene products and/or epitope tagged PKD interacting proteins (PKD-IP).
Such interacting proteins include, for example, focal adhesion complex
proteins such as FAK, paxillin, vinculin, talin and the like.
Присытствыющий вымысел снабубежит cell-based конструированные assays скрининга идентифицированный агент регулируют работу polycystic протеинов заболеванием почки зашифрованных генами PKD-1 и PKD-2 и может быть полезны в обработке polycystic заболевания почки. Assays вымысла состоят из контактировать genetically проектированных клеток выражая мутант или усеченный продукт гена PKD с веществом испытания и assaying для уменшения в посредничанном PKD фенотипе мутанта. Характеристики связали с таким фенотипом мутанта вклюают увеличенное придерживание к поверхностям типа iego покрынным коллагеном; верхушечное выражение НаК-ATFazy на мембране клетки; увеличенное выражение beta.-2$-NaK-ATFazy; и уменьшитое фокусное внесение киназы прилипания (FAK) в фокусные комплексы прилипания, и невозможность сформировать трубчатые структуры в матрице геля. Для того чтобы облегчить методы скрининга вымысла, клетки могут genetically быть проектированы для того чтобы выразить маркированные epitope продукты гена PKD and/or маркированные epitope протеины PKD взаимодействуя (PKD-IP). Такие взаимодействуя протеины вклюают, например, протеины фокусного прилипания сложные such as FAK, paxillin, vinculin, talin и подобие.
