Improved methods for in situ hybridization assays of cellular and
subcellular systems and tissue sections, and immobilization-based assay
techniques such as Northern blotting, Southern blotting, dot blots, and
the like, and assay techniques wherein the probes are bound to substrates
are disclosed. The subject invention employs crosslinker-containing
hybridization probes capable of forming covalent bonds between the probe
and the target nucleic acid. Upon activation, the crosslinker will, if the
probe has hybridized with its essentially complementary target, form
covalent bonds with the complementary strand to covalently crosslink the
probe to the target. Subsequently, stringent wash conditions may be
employed to reduce background signals due to non-specific absorption or
probes or targets, while retaining all crosslinked probe/target hybrids.
Also disclosed are diagnostic kits for use in clinical and diagnostic
laboratories.
Des méthodes améliorées pour des analyses in situ d'hybridation des systèmes et des sections cellulaires et sous-cellulaires de tissu, et les techniques immobilisation-basées d'analyse telles qu'éponger nordique, éponger méridional, taches de point, et semblables, et techniques d'analyse où les sondes sont liées aux substrats sont révélées. L'invention soumise utilise éditeur-contenir des sondes d'hybridation capables de former les obligations covalentes entre la sonde et l'acide nucléique de cible. Sur l'activation, l'éditeur absolu , si la sonde a hybridé avec son cible essentiellement complémentaire, forment les obligations covalentes avec la rive complémentaire pour réticuler en covalence la sonde à la cible. Plus tard, des états rigoureux de lavage peuvent être utilisés pour réduire des signaux de fond dus à l'absorption ou les sondes ou les cibles non spécifiques, tout en maintenant tous les hybrides réticulés de probe/target. En outre révélés sont des kits diagnostiques pour l'usage dans les laboratoires cliniques et diagnostiques.
