The current invention provides methods for producing a polypeptide as
inclusion bodies in bacterial host cells. The present methods are carried
out by forming a gene construct comprising the genetic sequence encoding a
polypeptide operatively linked to that of an inclusion partner protein,
such as E. coli thioredoxin or a modified E. coli thioredoxin, such that
host cells comprising the gene construct produce the polypeptide as
intracellular inclusion bodies. The methods of the present invention
facilitate the rapid isolation and purification of recombinant proteins.
In addition, the present methods may be useful for producing polypeptides
or proteins which are small and are typically difficult to express, as
well as those proteins that are toxic to host cells such as E. coli. The
present invention also provides plasmids, vectors and host cells to be
used in the present invention for production of polypeptides, and methods
of production of polypeptides using these vectors and host cells. The
invention further provides methods for producing protein molecular weight
ladders for use in protein gel electrophoresis, as well as proteins and
protein molecular weight ladders produced by these methods.
De huidige uitvinding verstrekt methodes om een polypeptide als opnemingsorganismen in bacteriële gastheercellen te produceren. De huidige methodes worden uitgevoerd door een genconcept te vormen bestaand uit de genetische opeenvolging coderend een polypeptide doeltreffend met betrekking tot dat van een proteïne van de opnemingspartner, zoals E. coli thioredoxin of gewijzigd E. coli thioredoxin, dusdanig dat de gastheercellen die uit het genconcept bestaan het polypeptide als intracellular opnemingsorganismen produceren. De methodes van de onderhavige uitvinding vergemakkelijken de snelle isolatie en de reiniging van recombinante proteïnen. Bovendien kunnen de huidige methodes nuttig zijn om polypeptiden of proteïnen die klein zijn en typisch moeilijk zijn uit te drukken, evenals die proteïnen te produceren die aan gastheercellen zoals E. coli giftig zijn. De onderhavige uitvinding verstrekt plasmiden, vectoren en ook gastheercellen die in de onderhavige uitvinding voor productie van polypeptiden moeten worden gebruikt, en methodes van productie van polypeptiden gebruikend deze vectoren en gastheercellen. De uitvinding verstrekt methodes om eiwit moleculegewichtladders te produceren voor gebruik in eiwitgelelektroforese, evenals proteïnen en eiwit moleculegewichtladders die door deze methodes verder worden veroorzaakt.
