Compositions and methods for expression of heterologous mammalian proteins
and their secretion in the biologically active mature form using a yeast
host cell as the expression system are provided. Compositions of the
invention are nucleotide sequences encoding a signal peptide sequence for
a yeast secreted protein, an optional leader peptide sequence for a yeast
secreted protein, a native propeptide leader sequence for a mature protein
of interest, and a sequence for the mature protein of interest, all
operably linked to a yeast promoter. Each of these elements is associated
with a processing site recognized in vivo by a yeast proteolytic enzyme.
Any or all of these processing sites may be a preferred processing site
that has been modified or synthetically derived for more efficient
cleavage in vivo. The compositions are useful in methods for expression of
heterologous mammalian proteins and their secretion in the biologically
active mature form. Particularly, vectors comprising these nucleotide
coding sequences can be used to transform a yeast host cell, which can
then be cultured and screened for secretion of the biologically active
mature protein of interest.
Las composiciones y los métodos para la expresión de proteínas mamíferas heterólogas y de su secreción en la forma madura biológico activa que usa una célula huesped de la levadura como el sistema de la expresión se proporcionan. Las composiciones de la invención son secuencias del nucleotide que codifican una secuencia del peptide de la señal para una proteína secretada levadura, una secuencia opcional del peptide del líder para una proteína secretada levadura, una secuencia nativa del líder del propeptide para una proteína madura del interés, y una secuencia para la proteína madura del interés, todo operably ligado a un promotor de la levadura. Cada uno de estos elementos se asocia a un sitio de proceso reconocido in vivo por una enzima proteolytic de la levadura. Cualesquiera o todos estos sitios de proceso pueden ser un sitio de proceso preferido que se ha modificado o se ha derivado sintético para una hendidura más eficiente in vivo. Las composiciones son útiles en los métodos para la expresión de proteínas mamíferas heterólogas y su secreción en la forma madura biológico activa. Particularmente, los vectores que abarcan estas secuencias de codificación del nucleotide se pueden utilizar para transformar una célula huesped de la levadura, que se puede después cultivar y defender para la secreción de la proteína madura biológico activa del interés.
