The present invention provides a method for the in vitro selection of
signaling aptamers comprising the steps of synthesizing a DNA pool, the
DNA having a random insert of nucleotides of a specific skewed mole ratio;
amplifying the DNA pool; transcribing an RNA pool from the amplified DNA
using a fluorescently labeled nucleotide; applying the fluorescently
labeled RNA pool to an affinity column to remove the high-affinity
fluorescent RNA molecules from the fluorescently labeled RNA pool;
obtaining a cDNA pool from the high-affinity fluorescent RNA molecules;
repeating the amplification and selection steps on the fluorescent RNA
molecules and cloning the fluorescent RNA molecules to yield signaling
aptamers. Signaling aptamers comprising DNA molecules are also selected
for. Also provided is a signaling aptamer that transduces the
conformational change upon binding a ligand to a change in fluorescence
intensity of the signaling aptamer.
Die anwesende Erfindung stellt eine Methode für die in-vitrovorwähler des Signalisierens der aptamers zur Verfügung, welche die Schritte vom Synthetisieren einer DNA Lache, die DNA enthalten, die einen gelegentlichen Einsatz der Nukleotide eines spezifischen skewed Molverhältnisses hat; Verstärkung der DNA Lache; Übertragen einer RNS-Lache von der verstärkten DNA mit einem fluorescently beschrifteten Nukleotid; Anwenden der fluorescently beschrifteten RNS-Lache an einer Affinität Spalte, um die Hochaffinität LeuchtstoffcRns-Moleküle von der fluorescently beschrifteten RNS-Lache zu entfernen; Erreichen einer DNA Lache von den Hochaffinität LeuchtstoffcRns-Molekülen; die Verstärkung und Vorwählerschritte auf den LeuchtstoffcRns-Molekülen wiederholen und die LeuchtstoffcRns-Moleküle klonend, um das Signalisieren von von aptamers zu erbringen. Signalisierend werden die aptamers, die DNA Moleküle enthalten, auch für vorgewählt. Auch ein gestellt das Signalisieren aptamer daß transduces die conformational Änderung nach dem Binden eines ligand an einer Änderung in der Fluoreszenzintensität des signalisierenden aptamer zur Verfügung.
