The present invention provides an isolated, functionally-active protein
that catalyzes cleavage of a gamma-secretase substrate. The functional
activity of the isolated protein suggests that the isolated protein
includes gamma-secretase. In one embodiment, the isolated gamma-secretase
protein is associated with PS1. The present invention also relates to
homogeneous methods for monitoring cleavage of .beta.-amyloid precursor
protein (.beta.APP) by gamma-secretase, wherein the steps of of isolating
and retrieving cleavage products have been eliminated. Cleavage can be
detected by binding a pair of fluorescent adducts to the gamma-cleaved
.beta.APP fragment. Preferably, a first fluorescent adduct binds to the
carboxy-terminal end of the gamma-cleaved .beta.APP fragment, with
substantially no cross-reactivity to uncleaved .beta.APP or to other types
of gamma-cleaved .beta.APP fragments, while a second fluorescent adduct
binds to a portion within the amino-terminal region on the gamma-cleaved
.beta.APP fragment. Detection of binding to the gamma-cleaved .beta.APP
fragment is determined by monitoring the fluorescent energy transfer
between the adducts.
La presente invenzione fornisce una proteina isolata e funzionale-attiva che catalizza la fenditura di un substrato di gamma-secretase-secretase. L'attività funzionale della proteina isolata suggerisce che la proteina isolata include il gamma-secretase-secretase. In un incorporamento, la proteina isolata di gamma-secretase-secretase è associata con PS1. La presente invenzione inoltre si riferisce ai metodi omogenei per il controllo della fenditura della proteina del precursore dell'beta.-amiloide (beta.APP) da gamma-secretase-secretase, in cui i punti di isolamento e di richiamo dei prodotti di fenditura sono stati eliminati. La fenditura può essere rilevata legando un accoppiamento dei complessi fluorescenti al frammento gamma-fenduto del beta.APP. Preferibilmente, un primo complesso fluorescente si lega all'estremità del carboxy-terminale del frammento gamma-fenduto del beta.APP, con sostanzialmente nessun reattività crociata a uncleaved il beta.APP o ad altri tipi di frammenti gamma-fenduti del beta.APP, mentre un secondo complesso fluorescente si lega ad una parte all'interno della regione del amminico-terminale sul frammento gamma-fenduto del beta.APP. La rilevazione di legarsi al frammento gamma-fenduto del beta.APP è determinata controllando il trasferimento di energia fluorescente fra i complessi.
