A novel gene defining a novel human UDP-GlcNAc: Gal.beta.1-3GalNAc.alpha.
.beta.1,6GlcNAc-transferase, termed C2GnT3, with unique enzymatic
properties is disclosed. The enzymatic activity of C2GnT3 is shown to be
distinct from that of previously identified enzymes of this gene family.
The invention discloses isolated DNA molecules and DNA constructs encoding
C2GnT3 and derivatives thereof by way of amino acid deletion, substitution
or insertion exhibiting C2GnT3 activity, as well as cloning and expression
vectors including such DNA, cells transfected with the vectors, and
recombinant methods for providing C2GnT3. The enzyme C2GnT3 and
C2GnT3-active derivatives thereof are disclosed, in particular soluble
derivatives comprising the catalytically active domain of C2GnT3. Further,
the invention discloses methods of obtaining 1,6-N-acetylglucosaminyl
glycosylated saccharides, glycopeptides or glycoproteins by use of an
enzymically active C2GnT3 protein or fusion protein thereof or by using
cells stably transfected with a vector including DNA encoding an
enzymatically active C2GnT3 protein as an expression system for
recombinant production of such glycopeptides or glycoproteins. Methods are
disclosed for the identification of agents with the ability to inhibit or
stimulate the biological activity of C2GnT3. Furthermore, methods of using
C2GnT3 in the structure-based design of inhibitors or stimulators thereof
are also disclosed in the invention. Also a method for the identification
of DNA sequence variations in the C2GnT3 gene by isolating DNA from a
patient, amplifying C2GnT3-coding exons by PCR, and detecting the presence
of DNA sequence variation, are disclosed.
Un gène de roman définissant un UDP-GlcNAc humain de roman : Gal.beta.1-3GalNAc.alpha. la beta.1,6GlcNAc-transférase, nommée C2GnT3, avec les propriétés enzymatiques uniques est révélée. L'activité enzymatique de C2GnT3 s'avère distincte de celle des enzymes précédemment identifiées de cette famille de gène. L'invention révèle les molécules d'isolement d'ADN et les constructions d'ADN codant C2GnT3 et dérivés en par la suppression d'acide aminé, la substitution ou l'insertion montrant l'activité C2GnT3, aussi bien que des vecteurs de clonage et d'expression comprenant une telle ADN, cellules transfected avec les vecteurs, et des méthodes de recombinaison pour fournir C2GnT3. L'enzyme C2GnT3 et des dérivés de C2GnT3-active en sont révélés, en particulier les dérivés solubles comportant le domaine catalytiquement actif de C2GnT3. De plus, l'invention révèle des méthodes d'obtenir les saccharides 1,6-N-acetylglucosaminyl glycosylés, les glycopeptides ou les glycoprotéines au moyen d'une protéine C2GnT3 enzymatiquement active ou de la protéine de fusion en ou en employant des cellules transfected stablement avec un vecteur comprenant l'ADN codant une protéine C2GnT3 enzymatiquement active comme système d'expression pour la production de recombinaison de tels glycopeptides ou glycoprotéines. Des méthodes sont révélées pour l'identification des agents avec la capacité d'empêcher ou stimuler l'activité biologique de C2GnT3. En outre, des méthodes d'employer C2GnT3 dans la conception structure-basée des inhibiteurs ou des stimulateurs en sont également révélées dans l'invention. En outre une méthode pour l'identification des variations d'ordre d'ADN du gène C2GnT3 en isolant l'ADN des exons patients et amplifiants de C2GnT3-coding PCR, et en détectant la présence de la variation d'ordre d'ADN, sont révélées.
