Methods and compounds are provided for detecting target molecules in a
sample using specific binding assays. In particular, methods are provided
for detecting a nucleic acid target in a sample. In one embodiment, the
method comprises hybridizing a nucleic acid target, comprising a target
nucleic acid sequence, to a nucleic acid probe, comprising a probe nucleic
acid sequence, wherein the target comprises a binding ligand. The
hydridized target is contacted with a receptor comprising multiple sites
capable of binding the binding ligand to complex the receptor to the
binding ligand, and the receptor is contacted with an amplification
reagent, comprising a plurality of the binding ligands, to complex the
amplification reagent to the receptor. The presence of the complexed
amplification reagent then is detected, for example, by detecting the
presence of a detectable label, such as a fluorescent label, for example,
on the receptor or the amplification reagent. Optionally, the
amplification reagent, comprising a plurality of the binding ligands, is
contacted with labeled receptor molecules thereby to complex a plurality
of labeled receptor molecules to the amplification reagent, and the
labeled receptor molecules complexed to the amplification reagent are
detected. This permits the detectable signal to be enhanced and amplified.
In one embodiment, the binding ligand is biotin, the receptor is
streptavidin, and the amplification reagent is an antibody or a DNA
matrix. In another embodiment, an array of different nucleic acid probes
immobilized on a surface, each having a defined sequence and location on
the surface, may be used in the assays, thus permitting screening and
detection of binding of a large number of nucleic acids.
Os métodos e os compostos são fornecidos detectando moléculas do alvo em uma amostra usando assays obrigatórios específicos. No detalhe, os métodos são fornecidos detectando um alvo do ácido nucleic em uma amostra. Em uma incorporação, o método compreende hybridizing um alvo do ácido nucleic, compreendendo uma seqüência do ácido nucleic do alvo, a uma ponta de prova do ácido nucleic, compreendendo uma seqüência do ácido nucleic da ponta de prova, wherein o alvo compreende um ligand obrigatório. Hydridized o alvo é contatado com um receptor que compreende os locais múltiplos capazes de ligar o ligand obrigatório ao complexo o receptor ao ligand obrigatório, e o receptor é contatado com um reagent do amplification, compreendendo um plurality dos ligands obrigatórios, ao complexo o reagent do amplification ao receptor. A presença do reagent complexed do amplification é detectada então, para o exemplo, detectando a presença de uma etiqueta detectável, tal como uma etiqueta fluorescente, para o exemplo, no receptor ou no reagent do amplification. Opcionalmente, o reagent do amplification, compreendendo um plurality dos ligands obrigatórios, é contatado com as moléculas etiquetadas do receptor desse modo ao complexo um plurality de moléculas etiquetadas do receptor ao reagent do amplification, e as moléculas etiquetadas do receptor complexed ao reagent do amplification são detectadas. Isto permite o sinal detectável ser realçado e amplificado. Em uma incorporação, o ligand obrigatório é biotin, o receptor é streptavidin, e o reagent do amplification é um antibody ou uma matriz do DNA. Em uma outra incorporação, em uma disposição das pontas de prova diferentes do ácido nucleic immobilized em uma superfície, em cada uma que tem uma seqüência e uma posição definidas na superfície, pode ser usado nos assays, na seleção e na deteção assim permitindo do emperramento de um grande número ácidos nucleic.
