The present invention relates to variants of a cell-wall degrading enzyme
having a beta-helix structure, which variant has at least one substituent
in a position determined by identifying all residues potentially belonging
to a stack; characterizing the stack as interior or exterior;
characterizing the stack as polar, hydrophobic or aromatic/heteroaromatic
based on the dominating characteristics of the parent or wild-type enzyme
stack residues and/or its orientation relative to the beta-helix (interior
or exterior); optimizing all stack positions of a stack either to
hydrophobic aliphatic amino acids, hydrophobic aromatic or polar amino
acids by allowing mutations within one or all positions to amino acids
belonging to one of these groups; measuring thermostability of the
variants by DSC or an application-related assay such as a Pad-Steam
application test; and selecting the stabilized variants. Variant of a
wild-type parent pectate lyase (EC 4.2.2.2) having the conserved amino
acid residues D111, D141 or E141, D145, K165, R194 and R199 when aligned
with the pectate lyase comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 2
are preferred.
Η παρούσα εφεύρεση αφορά τις παραλλαγές ενός ενζύμου υποβάθμισης κυψελοειδούς τοίχου που έχει μια δομή βήτα-ελίκων, ποια παραλλαγή έχει τουλάχιστον ένα substituent σε μια θέση που καθορίζεται με τον προσδιορισμό όλων των υπολειμμάτων που ανήκουν ενδεχομένως σε έναν σωρό χαρακτηρίζοντας το σωρό όπως εσωτερικό ή εξωτερικό χαρακτηρίζοντας το σωρό όπως πολικό, υδροφοβικός ή αρωματικός/heteroaromatic βασισμένο στα εξουσιάζοντας χαρακτηριστικά του ενζύμου γονέων ή άγριος-τύπων συσσωρεύστε τα υπολείμματα ή/και τον προσανατολισμό του σχετικά με το βήτα-έλικα (εσωτερικός ή εξωτερικός) βελτιστοποιώντας όλες τις θέσεις σωρών ενός σωρού είτε στα υδροφοβικά αλειφατικά αμινοξέα, τα υδροφοβικά αρωματικά είτε πολικά αμινοξέα με την άδεια των μεταλλαγών μέσα σε μια είτε όλες θέσεις στα αμινοξέα που ανήκουν σε μια από αυτές τις ομάδες μέτρηση thermostability των παραλλαγών από DSC ή μιας εφαρμογή-σχετικής με την δοκιμής όπως μια δοκιμή εφαρμογής μαξιλάρι-ατμού και επιλέγοντας τις σταθεροποιημένες παραλλαγές. Παραλλαγή pectate γονέων άγριος-τύπων lyase (ΕΚ 4.2.2.2) που έχει τα συντηρημένα υπολείμματα αμινοξέος D111, D141 ή E141, D145, K165, R194 και R199 όταν ευθυγραμμίζεται με pectate lyase περιλαμβάνοντας την ακολουθία αμινοξέος της ΑΚΌΛΟΥΘΗΣ ταυτότητας αριθ.: 2 προτιμώνται.
