A hybridization assay is provided which uses an oligonucleotide probe which
includes a fluorescent reporter molecule and a quencher molecule capable
of quenching the fluorescence of the reporter molecule. The
oligonucleotide probe is constructed such that the probe exists in at
least one single-stranded confirmation when unhybridized where the
quencher molecule is near enough to the reporter molecule to quench the
fluorescence of the reporter molecule. The oligonucleotide probe also
exists in at least one conformation when hybridized to a target
polynucleotide where the quencher molecule is not positioned close enough
to the reporter molecule to quench the fluorescence of the reporter
molecule. By adopting these hybridized and unhybridized conformations, the
reporter molecule and quencher molecule on the probe exhibits different
fluorescence signal intensities when the probe is hybridized and
unhybridized. As a result, it is possible to determine whether the probe
is hybridized or unhybridized based on a change in the fluorescence
intensity of the reporter molecule, the quencher molecule, or a
combination thereof. In addition, because the probe can be designed such
that the quencher molecule quenches the reporter molecule when the probe
is not hybridized, the probe can be designed such that the reporter
molecule exhibits limited fluorescence until the probe is either
hybridized or digested.
Assay гибридизации обеспечен использует зонд олигонуклеотида вклюает дневную молекулу репортера и молекулу quencher способные гасить флуоресцирование молекулы репортера. Зонд олигонуклеотида построен таким что зонд существует в по крайней мере одном, котор одиночн-seli на мель подтверждении когда unhybridized где молекула quencher около достаточно к молекуле репортера для того чтобы погасить флуоресцирование молекулы репортера. Зонд олигонуклеотида также существует в по крайней мере одной конформации после того как он гибридизирован к polynucleotide цели куда молекула quencher не расположена близко достаточно к молекуле репортера для того чтобы погасить флуоресцирование молекулы репортера. Путем принятие эти гибридизировали и unhybridized conformations, молекула репортера и молекула quencher на интенсивностях сигнала флуоресцирования экспонатов зонда по-разному когда зонд будет гибридизирован и unhybridized. В результате, по возможности обусловить гибридизирован ли зонд или unhybridized после того как я основано на изменении в интенсивности флуоресцирования молекулы репортера, молекулы quencher, или комбинации thereof. In addition, потому что зонд можно конструировать таким что молекула quencher гасит молекулу репортера когда зонд не гибридизирован, зонд можно конструировать таким что молекула репортера exhibits лимитированное флуоресцирование до тех пор пока не гибридизировать или усвоин зонд или.
