The present invention relates to a Drosophila in vitro system which was
used to demonstrate that dsRNA is processed to RNA segments 21-23
nucleotides (nt) in length. Furthermore, when these 21-23 nt fragments
are purified and added back to Drosophila extracts, they mediate RNA
interference in the absence of long dsRNA. Thus, these 21-23 nt fragments
are the sequence-specific mediators of RNA degradation. A molecular
signal, which may be their specific length, must be present in these
21-23 nt fragments to recruit cellular factors involved in RNAi. This
present invention encompasses these 21-23 nt fragments and their use for
specifically inactivating gene function. The use of these fragments (or
chemically synthesized oligonucleotides of the same or similar nature)
enables the targeting of specific mRNAs for degradation in mammalian
cells, where the use of long dsRNAs to elicit RNAi is usually not
practical, presumably because of the deleterious effects of the
interferon response. This specific targeting of a particular gene
function is useful in functional genomic and therapeutic applications.
De onderhavige uitvinding heeft op een systeem in vitro van het Fruitvliegje betrekking dat werd gebruikt om aan te tonen dat dsRNA aan de segmenten 21-23 nucleotiden (nt) van RNA in lengte wordt verwerkt. Voorts wanneer deze 21-23 ntfragmenten worden gezuiverd en terug naar de uittreksels van het Fruitvliegje toegevoegd, bemiddelen zij de interferentie van RNA bij gebrek aan lange dsRNA. Aldus, zijn deze 21-23 ntfragmenten de opeenvolging-specifieke bemiddelaars van de degradatie van RNA. Een moleculair signaal, dat hun specifieke lengte kan zijn, moet in deze 21-23 ntfragmenten aanwezig zijn om cellulaire factoren aan te werven betrokken bij RNAi. Deze onderhavige uitvinding omvat deze 21-23 ntfragmenten en hun gebruik voor specifiek het buiten werking stellen van genfunctie. Het gebruik van deze fragmenten (of chemisch samengestelde oligonucleotides van de zelfde of gelijkaardige aard) laat het richten van specifieke mRNAs voor degradatie in zoogdiercellen toe, waar het gebruik van lange dsRNAs om RNAi te onthullen gewoonlijk niet praktisch, vermoedelijk wegens de schadelijke gevolgen van de interferonreactie is. Dit het specifieke richten van een bepaalde genfunctie is nuttig in functionele genomic en therapeutische toepassingen.
