A method for detecting the presence of a target nucleic acid sequence in a
sample, said method comprising:
(a) adding to a sample suspected of containing said target nucleic acid
sequence, a probe specific for said target sequence and DNA duplex binding
agent, said probe comprising a reactive molecule able to absorb
fluorescence from or donate fluorescent energy to said DNA duplex binding
agent,
(b) subjecting the thus formed mixture to an amplification reaction in
which target nucleic acid is amplified,
(c) subjecting said sample to conditions under which the said probe
hybridizes to the target sequence, and
(d) monitoring fluorescence from said sample.
This method can be used for example to monitor amplification reactions such
as PCR reactions, such that the amount of target sequence present in the
sample may be determined. Additionally or alternatively, it may be used to
generate duplex destabilization data such as melt hysteresis information
for amplification monitoring or for detection and quantitation of
polymorphisms or allelic variation, and so is useful in genetic diagnosis.
Un metodo per la rilevazione della presenza di una sequenza in un campione, contenere detto dell'acido nucleico dell'obiettivo di metodo: (a) aggiungendo ad un campione ritenuto sospetto di contenere sequenza detta dell'acido nucleico dell'obiettivo, una sonda specifica per la sequenza detta dell'obiettivo e l'agente agglutinante duplex del DNA, sonda ad esempio che contiene una molecola reattiva in grado di assorbire fluorescenza da o di donare energia fluorescente all'agente agglutinante duplex detto del DNA, (b) sottoponendo la miscela così formata ad una reazione di amplificazione in cui l'acido nucleico dell'obiettivo è amplificato, (c) campione detto tematico alle circostanze in cui la sonda detta ibrida alla sequenza dell'obiettivo e (d) controllando fluorescenza dal campione detto. Questo metodo può essere usato per esempio per controllare le reazioni di amplificazione quali le reazioni di PCR, tali che la quantità di sequenza dell'obiettivo presente nel campione può essere determinata. Ulteriormente o alternativamente, può essere usato per generare i dati duplex di destabilizzazione quale le informazioni di isteresi della fusione per l'amplificazione che controlla o per rilevazione e la quantificazione dei polimorfismi o della variazione allelic ed in modo da è utile nella diagnosi genetica.
