Disclosed are methods for generating mycolic acid bacterial biosensors for
particular analytes (especially industrial pollutants) by the use of
innovative methods for isolating DNA encoding an inducible promoter which
is induced in response to the specific analyte (and/or associated operon
proteins), the methods generally comprising the steps of: (a) culturing a
source of mycolic acid bacteria in a selective medium containing said
specific analyte and being selective for oligotriphic bacteria; (b)
identifying mycolic acid bacteria capable of subsisting on said medium,
especially those which do not display catabolic repression; (c) extracting
DNA from said mycolic acid bacteria; (d) incorporating said DNA into
vectors, such as various shuttle vectors; (e) cloning said vector into a
suitable host cell (which may be E. coli strain carrying one or more of
the mcrABC mrr hsdSRM recA and recO mutations); (f) screening that host
cell (or a second host cell which is preferably a corynebacterium) for
said inducible promoter. The methods are exemplified by the isolation of
the R. corallina ohp operon.
Показаны методы для производить mycolic кисловочные бактериальные биосенсоры для определенных analytes (специально промышленных поллютантов) пользой новаторских методов для изолировать ДНАО шифруя индуцибильный promoter наведен in response to специфически analyte (and/or связанные протеины operon), методы вообще состоя из шагов: (a) выращивающ в питательной среде: источник mycolic кисловочных бактерий в селективном средстве содержа сказанный специфически analyte и селективный для oligotriphic бактерий; (b) определяющ mycolic кисловочные бактерии способные существовать на сказанном средстве, специально те которые не показывают катаболическую репрессию; (c) извлекать ДНАО от сказанных mycolic кисловочных бактерий; (d) включая сказанное ДНАО в векторы, such as различные векторы челнока; (e) клонируя сказанный вектор в целесообразной ведущей ячейкой (может быть напряжение E coli one or more нося из перегласовок recA и recO hsdSRM mrr mcrABC); (f) скрининг ведущая ячейка (или вторая ведущая ячейка будет предпочтительн коринебактерия) для сказанного индуцибильного promoter. Методы приведены в пример изоляцией operon ohp corallina R.
