The methods, compositions and apparatus disclosed herein are of use for
nucleic acid sequence determination. The methods involve isolation of one
or more nucleic acid template molecules and polymerization of a nascent
complementary strand of nucleic acid, using a DNA or RNA polymerase or
similar synthetic reagent. As the nascent strand is extended one
nucleotide at a time, the disappearance of nucleotide precursors from
solution is monitored by Raman spectroscopy or FRET. The nucleic acid
sequence of the nascent strand, and the complementary sequence of the
template strand, may be determined by tracking the order of incorporation
of nucleotide precursors during the polymerization reaction. Certain
embodiments concern apparatus comprising a reaction chamber and detection
unit, of use in practicing the claimed methods. The methods, compositions
and apparatus are of use in sequencing very long nucleic acid templates in
a single sequencing reaction.
I metodi, le composizioni e gli apparecchi rilevati qui sono utili per determinazione di sequenza dell'acido nucleico. I metodi coinvolgono l'isolamento di una o più molecole della mascherina dell'acido nucleico e polimerizzazione di un filo complementare nascente di acido nucleico, usando una polimerasi del RNA o del DNA o il reagente sintetico simile. Poichè il filo nascente è un nucleotide esteso alla volta, la scomparsa dei precursori del nucleotide dalla soluzione è controllata dalla spettroscopia o dal CERCHIO del Raman. La sequenza dell'acido nucleico del filo nascente e la sequenza complementare del filo della mascherina, possono essere determinate rintracciando l'ordine dell'incorporazione dei precursori del nucleotide durante la reazione di polimerizzazione. Determinati incorporamenti interessano gli apparecchi che contengono un'unità dell'alloggiamento e di rilevazione di reazione, l'uso nell'esercitarsi nei metodi esatti. I metodi, le composizioni e gli apparecchi sono utili nell'ordinare le mascherine in serie molto lunghe dell'acido nucleico in una singola reazione ordinante.
