Methods are provide for preparing cDNA corresponding to a mRNA. In the
subject methods, a mRNA is first contacted with a mixture of primers under
first strand cDNA synthesis conditions. The primer mixture contains
primers that have at least 10 contiguous deoxythymidines, a double
stranded restriction enzyme recognition sequence near one end and a
non-polyA-complementary region near the other end, where the
non-polyA-complementary region is -VV, -VTV, -VTTV, -VTTTV, and -VVVVV.
The resultant cDNA is modified such that the polyT tail is substantially
removed. The modified cDNA is then ligated into a vector. The subject
methods find use in a variety of applications, and find particular use in
the sequencing of DNA and in the synthesis of cDNA libraries.
Les méthodes sont prévoient préparer l'ADN correspondant à un mRNA. Dans les méthodes soumises, un mRNA est d'abord entré en contact avec un mélange des amorces dans les premières conditions de synthèse d'ADN de rive. Le mélange mieux habillé contient les amorces qui ont au moins 10 deoxythymidines contigus, un double ordre échoué d'identification d'enzymes de restriction près d'une extrémité et une région non-polyA-complémentaire près de l'autre extrémité, où la région non-polyA-complémentaire est - VV, - VTV, - VTTV, - VTTTV, et - VVVVV. L'ADN résultante est modifiée tels que la queue de polyT est sensiblement enlevée. L'ADN modifiée est alors ligaturée dans un vecteur. Les méthodes soumises trouvent l'utilisation dans une variété d'applications, et trouvent l'utilisation particulière dans l'ordonnancement de l'ADN et dans la synthèse des bibliothèques d'ADN.
