The present invention provides a new protocol for quantifying multiplex
real-time polymerase chain reaction (PCR). In particular, the present
invention provides methods of quantifying multiple PCR products or
amplicons in a single real-time PCR reaction based on the different
melting temperatures (T.sub.m) of each amplicon and the emission changes
of double stranded DNA dyes such as SYBR Green I when amplicons are in
duplex or in separation. For a specific amplicon with a T.sub.m, the
emission difference between the emission reading taken at a temperature
below the T.sub.m and the emission reading taken at a temperature above
the T.sub.m corresponds to the emission value of the amplicon in duplex.
Accordingly, the emission difference of each amplicon in a single PCR
reaction can be used to quantify each amplicon. The present invention
further provides computer programs or computer products which perform the
methods described herein.
Η παρούσα εφεύρεση παρέχει ένα νέο πρωτόκολλο για την ποσολόγηση της πολλαπλής σε πραγματικό χρόνο αλυσιδωτής αντίδρασης πολυμεράσεων (pcr). Ειδικότερα, η παρούσα εφεύρεση παρέχει τις μεθόδους τα πολλαπλάσια pcr προϊόντα ή amplicons σε μια ενιαία σε πραγματικό χρόνο pcr αντίδραση βασισμένη στις διαφορετικές θερμοκρασίες τήξης (T.sub.m) κάθε amplicon και των αλλαγών εκπομπής των διπλών προσαραγμένων χρωστικών ουσιών DNA όπως SYBR πράσινο ι όταν amplicons είναι στο ντούμπλεξ ή στο χωρισμό. Για ένα συγκεκριμένο amplicon με ένα T.sub.m, η διαφορά εκπομπής μεταξύ της ανάγνωσης εκπομπής που λαμβάνονται σε μια θερμοκρασία κάτω από το T.sub.m και της ανάγνωσης εκπομπής που λαμβάνεται σε μια θερμοκρασία επάνω από το T.sub.m αντιστοιχεί στην αξία εκπομπής του amplicon στο ντούμπλεξ. Συνεπώς, η διαφορά εκπομπής κάθε amplicon σε μια ενιαία pcr αντίδραση μπορεί να χρησιμοποιηθεί για να ποσολογήσει κάθε amplicon. Η παρούσα εφεύρεση παρέχει περαιτέρω τα προγράμματα υπολογιστών ή τα προϊόντα υπολογιστών που εκτελούν τις μεθόδους που περιγράφονται εν τω παρόντι.
