Compositions, reaction mixtures, and kits, as well as methods for their
use, comprising a pair of FRET hybridization probes hybridizing
adjacently to a target nucleic acid sequence, each hybridization probe
comprising (i) a nucleotide sequence entity which is substantially
complementary to the sequence of the target nucleic acid, (ii) a
fluorescent entity, being either a FRET donor entity or a FRET acceptor
entity, and (iii) a spacer entity connecting the nucleotide sequence
entity and the fluorescent entity. The intensity of fluorescence emission
from the FRET donor entity and from the FRET acceptor entity is not
substantially affected by quenching activity of nucleotide residues
present in the sequence of the target nucleic acid or in the nucleotide
sequence entities of the hybridization probes.
As composições, as misturas de reação, e os jogos, assim como os métodos para seu uso, compreendendo um par do hybridization do FRET sondam hybridizing adjacente a uma seqüência do ácido nucleic do alvo, cada ponta de prova do hybridization que compreende (i) uma entidade da seqüência do nucleotide que seja substancialmente complementar à seqüência do ácido nucleic do alvo, (ii) uma entidade fluorescente, sendo uma entidade fornecedora do FRET ou uma entidade do aceitador do FRET, e (iii) uma entidade do espaçador que conecta a entidade da seqüência do nucleotide e a entidade fluorescente. A intensidade da emissão do fluorescence da entidade fornecedora do FRET e da entidade do aceitador do FRET não é afetada substancialmente extinguindo a atividade dos resíduos do nucleotide atuais na seqüência do ácido nucleic do alvo ou na seqüência do nucleotide as entidades do hybridization sondam.
