Reversibly modified thermostable enzymes for DNA synthesis and amplification in vitro

   
   

The invention relates to a composition comprising a first modified thermostable enzyme exhibiting 3'exonuclease activity but essentially no DNA polymerase activity and a second modified thermostable enzyme exhibiting DNA polymerase activity, whereas the fidelity of an amplification process is enhanced by the use of the composition in an amplification process in comparison to the use of the single second enzyme in an amplification process and, whereas said first and said second modified thermostable enzyme is reversibly modified by an inhibiting agent which results in essentially complete inactivation of enzyme activity, wherein incubation of said first and said second modified thermostable enzyme in an aqueous buffer at alkaline pH at a temperature less than 25.degree. C. for 20 minutes results in no significant increase in the activity of said first and said second modified thermostable enzyme, wherein incubation at a temperature greater than 50.degree. C. in an aqueous buffer at alkaline pH results in at least tow-fold increase in enzyme activity in less than 20 minutes which allow formation of primer extension products.

A invenção relaciona-se a uma composição que compreende um enzyme thermostable primeiramente modificado que não exibem a atividade 3'exonuclease mas essencialmente a nenhuma atividade do polymerase do DNA e um segundo enzyme thermostable modificado que exibe a atividade do polymerase do DNA, visto que o fidelity de um processo do amplification é realçado pelo uso da composição em um processo do amplification na comparação com o uso do único segundo enzyme em um processo do amplification e, visto que dito o primeiro e segundo enzyme thermostable modificado dito é modificado reversìvel por um agente inibindo que resulte no inactivation essencialmente completo da atividade de enzyme, wherein o incubation de primeiro dito e o segundo dito modificaram o enzyme thermostable em um amortecedor aqueous no pH alcalino em uma temperatura mais menos do que 25.degree. O C. para 20 resultados dos minutos em nenhum aumento significativo na atividade de primeira dito e o segundo dito modificaram o enzyme thermostable, wherein incubation em uma temperatura mais grande do que 50.degree. O C. em um amortecedor aqueous em resultados alcalinos do pH em ao menos reboc-dobra o aumento na atividade de enzyme em menos de 20 minutos que permitem a formação de uns produtos mais maiss bem vestido da extensão.

 
Web www.patentalert.com

< Biotin biosynthetic genes

< Use of intramolecularly, covalently cross-linked proteins as binding partners in immunoassays

> Recombinant L-N-carbamoylase from Arthrobacter aurescens and method of producing L-amino acids therewith

> Method, system and reaction vessel for processing a biological sample contained in a liquid

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