The present invention provides an enzymatic cycling assay for assessing the
amount of homocysteine and/or cystathionine in a solution such as blood,
blood derivatives, or urine. The assay comprises the steps of contacting
the solution containing homocysteine and/or cystathionine to form a
reaction mixture, with CBS, or a derivative thereof, L-serine, and CBL, or
a derivative thereof, for a time period sufficient to catalyze the
cyclical conversion of homocysteine form to cystathionine and the
reconversion of cystathionine to homocysteine with the production of
pyruvate and ammonia; determining the amount of homocysteine and/or
ammonia present in the reaction mixture; and determining the amount of
homocysteine and/or cystathionine present in the solution based on the
amount of pyruvate and/or ammonia formed. Expression vectors and isolation
procedures for CBS, or derivatives thereof, and CBL, or derivatives
thereof, are also provided as well as test kits for carrying out the
assay. In preferred embodiments, the assays can be conducted in 15 minutes
or less, with a minimum of enzyme usage.
A invenção atual fornece um assay dando um ciclo enzymatic avaliando a quantidade de homocysteine e/ou de cystathionine em uma solução tal como o sangue, os derivatives do sangue, ou o urine. O assay compreende as etapas de contatar a solução que contem o homocysteine e/ou o cystathionine para dar forma a uma mistura de reação, com CBS, ou um derivative disso, L-l-serine, e CBL, ou um derivative disso, por um período de tempo suficiente catalyze a conversão cíclica do formulário do homocysteine ao cystathionine e o reconversion do cystathionine ao homocysteine com a produção do pyruvate e da amônia; determinando a quantidade de homocysteine e/ou de amônia atuais na mistura de reação; e determinando a quantidade de homocysteine e/ou de cystathionine atuais na solução baseada na quantidade de pyruvate e/ou de amônia dados forma. Os vetores da expressão e os procedimentos da isolação para o CBS, ou derivatives disso, e CBL, ou derivatives disso, são fornecidos também assim como jogos do teste para realizar o assay. Em incorporações preferidas, os assays podem ser conduzidos em 15 minutos ou mais menos, com um mínimo do uso do enzyme.
