The present invention provides a method for high frequency of allelic exchange in the slow-growing mycobacteria using in vitro generated specialized transducing mycobacteriophages, as well as the recombinant slow-growing mycobacteria generated using the disclosed method. A transducing mycobacteriophage of the present invention comprises a conditional mycobacteriophage containing an E. coli bacteriophage lambda cosmid inserted into a non-essential region of the mycobacteriophage, said cosmid containing a mutated DNA substrate which is homologous to a wildtype nucleic acid sequence of a slow-growing mycobacterium. When slow-growing mycobacteria infected with the conditional transducing phage are cultured under conditions wherein the conditional transducing phage does not replicate, the mutated DNA substrate is incorporated into the chromosomal DNA of the slow-growing mycobacteria by homologous recombination, thereby generating the recombinant slow-growing mycobacteria of the present invention. The disclosed method may be used to produce mycobacterial auxotrophs, including leucine and lysine auxotrophs.

De onderhavige uitvinding verstrekt een methode voor hoge frequentie van allelic uitwisseling in de traaggroeiende mycobacteriën gebruikend in vitro geproduceerde gespecialiseerde transducerende mycobacteriophages, evenals de recombinante traaggroeiende geproduceerde mycobacteriën gebruikend de onthulde methode. Een transducerende mycobacteriophage van de onderhavige uitvinding bestaat uit een voorwaardelijke mycobacteriophage die de bacteriofaaglambda cosmid bevat van E. coli die in een niet-essentieel gebied van mycobacteriophage wordt opgenomen, bovengenoemde cosmid die een veranderd substraat van DNA bevat dat aan een opeenvolging van het wildtype nucleic zuur van een traaggroeiende mycobacterie homoloog is. Wanneer de traaggroeiende mycobacteriën besmet met de voorwaardelijke transducerende bacteriofaag in de omstandigheden worden gecultiveerd waarin de voorwaardelijke transducerende bacteriofaag niet herhaalt, wordt het veranderde substraat van DNA opgenomen in chromosomale DNA van de traaggroeiende mycobacteriën door homologe nieuwe combinatie, daardoor producerend de recombinante traaggroeiende mycobacteriën van de onderhavige uitvinding. De onthulde methode kan worden gebruikt om mycobacterial auxotrophs, met inbegrip van leucine en lysineauxotrophs te produceren.