Methods and compounds are provided for detecting target molecules in a
sample using specific binding assays. In particular, methods are provided
for detecting a nucleic acid target in a sample. In one embodiment, the
method comprises hybridizing a nucleic acid target, comprising a target
nucleic acid sequence, to a nucleic acid probe, comprising a probe nucleic
acid sequence, wherein the target comprises a binding ligand. The
hydridized target is contacted with a receptor comprising multiple sites
capable of binding the binding ligand to complex the receptor to the
binding ligand, and the receptor is contacted with an amplification
reagent, comprising a plurality of the binding ligands, to complex the
amplification reagent to the receptor. The presence of the complexed
amplification reagent then is detected, for example, by detecting the
presence of a detectable label, such as a fluorescent label, for example,
on the receptor or the amplification reagent. Optionally, the
amplification reagent, comprising a plurality of the binding ligands, is
contacted with labeled receptor molecules thereby to complex a plurality
of labeled receptor molecules to the amplification reagent, and the
labeled receptor molecules complexed to the amplification reagent are
detected. This permits the detectable signal to be enhanced and amplified.
In one embodiment, the binding ligand is biotin, the receptor is
streptavidin, and the amplification reagent is an antibody or a DNA
matrix. In another embodiment, an array of different nucleic acid probes
immobilized on a surface, each having a defined sequence and location on
the surface, may be used in the assays, thus permitting screening and
detection of binding of a large number of nucleic acids.
Οι μέθοδοι και οι ενώσεις παρέχονται για την ανίχνευση των μορίων στόχων σε ένα δείγμα χρησιμοποιώντας τις συγκεκριμένες δεσμευτικές δοκιμές. Ειδικότερα, οι μέθοδοι παρέχονται για την ανίχνευση ενός στόχου νουκλεϊνικού οξέος σε ένα δείγμα. Σε μια ενσωμάτωση, η μέθοδος περιλαμβάνει την υβριδοποίηση ενός στόχου νουκλεϊνικού οξέος, περιλαμβάνοντας μια ακολουθία νουκλεϊνικού οξέος στόχων, σε έναν έλεγχο νουκλεϊνικού οξέος, περιλαμβάνοντας μια ακολουθία νουκλεϊνικού οξέος ελέγχων, όπου ο στόχος περιλαμβάνει μια σύνδεση ligand. Ο στόχος έρχεται σε επαφή με με έναν δέκτη περιλαμβάνοντας τις πολλαπλάσιες περιοχές ικανές τη σύνδεση ligand για να περιπλέξει το δέκτη στη σύνδεση ligand, και ο δέκτης έρχεται σε επαφή με με ένα αντιδραστήριο ενίσχυσης, περιλαμβάνοντας μια πολλαπλότητα της σύνδεσης ligands, για να περιπλέξει το αντιδραστήριο ενίσχυσης στο δέκτη. Η παρουσία του περιπλεγμένου αντιδραστηρίου ενίσχυσης έπειτα ανιχνεύεται, παραδείγματος χάριν, με την ανίχνευση της παρουσίας μιας ανιχνεύσιμης ετικέτας, όπως μια φθορισμού ετικέτα, παραδείγματος χάριν, στο δέκτη ή το αντιδραστήριο ενίσχυσης. Προαιρετικά, το αντιδραστήριο ενίσχυσης, που περιλαμβάνει μια πολλαπλότητα της σύνδεσης ligands, έρχεται σε επαφή με με τα επονομαζόμενα μόρια δεκτών με αυτόν τον τρόπο για να περιπλέξει μια πολλαπλότητα των επονομαζόμενων μορίων δεκτών στο αντιδραστήριο ενίσχυσης, και τα επονομαζόμενα μόρια δεκτών που περιπλέκονται στο αντιδραστήριο ενίσχυσης ανιχνεύονται. Αυτό επιτρέπει στο ανιχνεύσιμο σήμα για να ενισχυθεί και να ενισχυθεί. Σε μια ενσωμάτωση, η σύνδεση ligand είναι biotin, ο δέκτης είναι streptavidin, και το αντιδραστήριο ενίσχυσης είναι ένα αντίσωμα ή μια μήτρα DNA. Σε μια άλλη ενσωμάτωση, μια σειρά διαφορετικών ελέγχων νουκλεϊνικού οξέος που ακινητοποιούνται σε μια επιφάνεια, κάθε μια που έχει μια καθορισμένες ακολουθία και μια θέση στην επιφάνεια, μπορεί να χρησιμοποιηθεί στις δοκιμές, επιτρέποντας κατά συνέπεια τη διαλογή και την ανίχνευση της σύνδεσης ενός μεγάλου αριθμού νουκλεϊνικών οξέων.