A method for separating microorganisms, especially infectious agents, from
a mixture by two dimensional centrifugation on the basis of sedimentation
rate and isopycnic banding density, for sedimenting such microorganisms
through zones of immobilized reagents to which they are resistant, for
detecting banded particles by light scatter or fluorescence using nucleic
acid specific dyes, and for recovering the banded particles in very small
volumes for characterization by mass spectrometry of viral protein
subunits and intact viral particles, and by fluorescence flow cytometric
determination of both nucleic acid mass and the masses of fragments
produced by restriction enzymes. The method is based on the discovery that
individual microorganisms, such as bacterial and viral species, are each
physically relatively homogeneous, and are distinguishable in their
biophysical properties from other biological particles, and from
non-biological particles found in nature. The method is useful for
distinguishing infections, for identifying known microorganisms, and for
discovering and characterizing new microorganisms. The method provides
very rapid identification of microorganisms, and hence allows a rational
choice of therapy for identified infectious agents. A particularly useful
application is in clinical trials of new antibiotics and antivirals, where
it is essential to identify at the outset individuals infected with the
targeted infectious agent.
Un método para separar los microorganismos, especialmente agentes infecciosos, de una mezcla por la centrifugación de dos dimensiones en base de la tarifa de la sedimentación y de la densidad isopycnic de las bandas, para sedimentarse tales microorganismos con zonas de los reactivo inmovilizados a los cuales son resistentes, porque detectar partículas congregadas por la dispersión ligera o fluorescencia usando los tintes del específico del ácido nucleic, y para recuperar las partículas congregadas en los volúmenes muy pequeños para la caracterización por el spectrometry total de las subunidades virales de la proteína y las partículas virales intactas, y por la determinación cytometric del flujo de la fluorescencia de ambos masa del ácido nucleic y las masas de fragmentos produjo por las enzimas de la restricción. El método se basa en el descubrimiento que los microorganismos individuales, tales como especie bacteriana y viral, son cada uno físicamente relativamente homogéneo, y es distinguible en sus características biofísicas de otras partículas biológicas, y de las partículas no-biolo'gicas encontradas en naturaleza. El método es útil para distinguir infecciones, para identificar microorganismos sabidos, y para descubrir y caracterizar microorganismos nuevos. El método proporciona la identificación muy rápida de microorganismos, y por lo tanto permite una opción racional de la terapia para los agentes infecciosos identificados. Un uso particularmente útil está en ensayos clínicos de antibióticos y de antivirals nuevos, donde está esencial identificar en los individuos del principio infectados con el agente infeccioso apuntado.