A method for the production of transgenic plants is provided in which a
vector carrying a gene encoding the green fluorescent protein is
introduced into cells, the cells are screened for the protein and
transformed cells are selected and regenerated. The cellular toxicity of
the green fluorescent protein is circumvented by regulating expression of
the gene encoding the protein or directing the protein to a subcellular
compartment where it is not toxic to the cell. DNA constructs are provided
for cell transformation in which the expression of a gene encoding the
green fluorescent protein is placed under the control of an inducible
promoter. In addition, DNA constructs are provided in which a nucleotide
sequence encoding the green fluorescent protein is operably linked to a
signal sequence which directs the expressed protein to a subcellular
compartment where the protein is not toxic to the cell. Oxidative stress
to plant cells transformed with GFP also can be ameliorated by
transforming cells with an expression vector comprising genes encoding GFP
and an oxygen scavenger enzyme such as superoxide dismutase. The toxicity
of GFP in transformed plants can be eliminated by excising the screenable
marker gene following detection of transformed cells or sectors. The
FLP/FRT system is used in conjunction with GFP as a visible marker for
transformation and FRT excision. A nucleotide sequence optimized for
expression of the green fluorecent protein in plants is also provided.
Un método para la producción de las plantas transgenic se proporciona en las cuales un vector que lleva un gene que codifica la proteína fluorescente verde se introduce en las células, las células se defiende para la proteína y se seleccionan y se regeneran las células transformadas. La toxicidad celular de la proteína fluorescente verde es evitada regulando la expresión del gene que codifica la proteína o que dirige la proteína a un compartimiento subcelular donde no está tóxica a la célula. Las construcciones de la DNA se proporcionan para la transformación de la célula en la cual la expresión de un gene que codifica la proteína fluorescente verde se pone bajo control de un promotor inducible. Además, se proporcionan las construcciones de la DNA en las cuales una secuencia del nucleotide que codifica la proteína fluorescente verde operably se liga a una secuencia de la señal que dirija la proteína expresada a un compartimiento subcelular donde no está tóxica la proteína a la célula. La tensión oxidative para plantar las células transformadas con GFP también puede ser mejorada transformando las células con un vector de la expresión que abarca los genes que codifican GFP y una enzima del limpiador del oxígeno tal como dismutase del superoxide. La toxicidad de GFP en plantas transformadas puede ser eliminada suprimiendo la detección de siguiente del gene screenable del marcador de células o de sectores transformados. El sistema de FLP/FRT se utiliza conjuntamente con GFP como marcador visible para la transformación y la supresión de FRT. Una secuencia del nucleotide optimizada para la expresión de la proteína fluorecent verde en plantas también se proporciona.
