RNA polymerase I transcription in vivo in transiently DNA-transfected cells has been used for expression of influenza vRNA molecules coding for chloramphenicol acetyltransferase (CAT) in anti-sense orientation. Influenza virus superinfection served to provide viral RNA polymerase and other proteins for transcriptional conversion of minus-strand vRNA into plus-strand viral mRNA molecules expressing CAT activity. This system has been used for an analysis via nucleotide exchanges as well as deletions and insertions of both terminal segments of the vRNA sequence which cooperatively constitute the vRNA promoter structure. Several mutants with greatly enhanced expression rates over wild-type levels have been constructed, which also can be packaged and serially passaged into progeny virus. The data obtained for the mutations in various promoter elements support a model of consecutive, double strand vRNA promoter structures in binding of viral polymerase and initiation of RNA synthesis. Preparations of attenuated influenza virus for vaccination purposes include a single recombinant segment with promoter up mutation(s) for over-expression of an own or foreign gene product, which at the same time because of its over-replication serves to decrease the number of helper virus RNP segments. The same viruses further have been passaged through a step of ribozyme cleavage acting at one of the helper viral segments, which will delete this vital function and structure with high rates from the virus progeny. The resulting attenuated viruses will interact with their target cells in only one round of abortive infection, and are unable to produce viral progeny.

Übertragung der RNS-Polymerase I in vivo vorübergehend in den Zellen DNA-TRANSFECTED ist für Ausdruck der Grippe vRNA Moleküle benutzt worden, die für Chloromycetinacetyltransferase (CAT) kodieren in Anti-abfragen Lagebestimmung. Grippevirus superinfection diente, Viren-RNS-Polymerase und andere Proteine für transcriptional Umwandlung von Minusfaser vRNA Plusfaser in die VirenmRNA Moleküle zur Verfügung zu stellen, die CAT Tätigkeit ausdrücken. Dieses System ist für eine Analyse über Nukleotidaustäusche benutzt worden, sowie Auslassungen und Einfügungen beider Terminalsegmente der vRNA Reihenfolge, die kooperativ die vRNA Fördererstruktur festsetzen. Einige Durch Mutation entstehende Variationen mit groß erhöhter Ausdruck Rate über Wildart Niveaus sind konstruiert worden, die in Nachkommenvirus auch verpackt werden und serienmäßig passieren gelassen werden kann. Die Daten, die für die Veränderungen in den verschiedenen Fördererelementen erhalten werden, stützen ein Modell der nachfolgenden, doppelten Faser vRNA Fördererstrukturen in der Schwergängigkeit der Virenpolymerase und Einführung der RNS-Synthese. Vorbereitungen des verminderten Grippevirus zu den Schutzimpfungzwecken schließen ein einzelnes recombinant Segment mit Förderer herauf mutation(s) für über-Ausdruck von ein zu besitzen oder von fremdem Genprodukt, das gleichzeitig wegen seiner über-Reproduktion dient, die Zahl Segmenten des Helfervirus zu verringern RNP. Die gleichen Viren, die weiter sind, sind durch einen Schritt der ribozyme Spaltung fungierend bei einem der Helfervirensegmente passieren gelassen worden, die diese lebenswichtige Funktion und Struktur mit hoher Rate aus den Virusnachkommen löschen. Die resultierenden verminderten Viren wirken auf ihre Zielzellen in nur einer ein, die von der vorzeitigen Infektion rund ist, und sind nicht imstande, Virennachkommen zu produzieren.