The invention provides an in vitro single cycle, recombinant virus assay
(RVA) for determining inhibition of HIV replication by a protease
inhibitor. The assay comprises transfecting a human epithelial cell line
with amplified HIV protease sequences of an HIV virus; an HIV envelope
defective molecular clone having a complete deletion of its protease
coding sequence as well as two separate deletions in its env gene and a
deletion of part of its gag gene; and a plasmid containing HIV envelope
coding sequence under the control of a promoter for phenotypic
complementation of the envelope defective molecular clone. The transfected
cells are cultured in the presence of a protease inhibitor to produce a
testable stock of infectious particles that can be used to infect
indicator cells containing an indicator gene without amplification of the
infectious particles prior to infecting the indicator cells. Accumulation
of indicator gene product is a measure of inhibition of HIV replication by
the protease inhibitor.
L'invenzione fornisce un singolo ciclo in vitro, l'analisi recombinant del virus (RVA) per la determinazione dell'inibizione di replica del HIV da un inibitore della proteasi. L'analisi contiene transfecting una linea umana delle cellule epiteliali con le sequenze amplificate della proteasi del HIV di un virus del HIV; un clone molecolare difettoso della busta del HIV che ha un'omissione completa della relativa sequenza di codificazione della proteasi così come due omissioni separate nel relativo gene del env e un'omissione della parte del relativo gene del bavaglio; e un plasmide che contiene sequenza di codificazione della busta del HIV sotto il controllo di un promotore per complementazione fenotipica del clone molecolare difettoso della busta. Transfected le cellule sono coltivati in presenza di un inibitore della proteasi per produrre lle azione saggiabili delle particelle contagiose che possono essere usate per infettare le cellule dell'indicatore che contengono un gene dell'indicatore senza amplificazione delle particelle contagiose prima dell'infezione delle cellule dell'indicatore. L'accumulazione del prodotto del gene dell'indicatore è una misura di inibizione di replica del HIV dall'inibitore della proteasi.
