A method for observing and determining the size of individual molecules and
for determining the weight distribution of a sample containing molecules
of varying size, which involves placing a deformable or nondeformable
molecule in a medium, subjecting the molecule to an external force,
thereby causing conformational and/or positional changes, and then
measuring these changes. Preferred ways to measure conformational and
positional changes include: (1) determining the rate at which a deformable
molecule returns to a relaxed state after termination of the external
force, (2) determining the rate at which a molecule becomes oriented in a
new direction when the direction of the perturbing force is changed, (3)
determining the rate at which a molecule rotates, (4) measuring the length
of a molecule, particularly when it is at least partially stretched, or
(5) measuring at least one diameter of a spherical or ellipsoidal
molecule. Measurements of relaxation, reorientation, and rotation rates,
as well as length and diameter can be made using a light microscope
connected to an image processor. Molecule relaxation, reorientation and
rotation also can be determined using a microscope combined with a
spectroscopic device. The invention is particularly useful for measuring
polymer molecules, such as nucleic acids, and can be used to determine the
size and map location of restriction digests. Breakage of large polymer
molecules mounted on a microscope slide is prevented by condensing the
molecules before mounting and unfolding the molecules after they have been
placed in a matrix.
Метод для наблюдать и обусловливать размер индивидуальных молекул и для обусловливать распределение веса образца содержа молекулы меняя размера, который включает установить deformable или nondeformable молекулу в средств, подвергающ молекулу к внешнему усилию, таким образом причиняющ conformational and/or позиционноцикловые изменения, и после этого измеряющ эти изменения. Предпочитаемые дороги измерить conformational и позиционноцикловые изменения вклюают: (1) обусловливающ тариф на deformable молекула возвращает к ослабленному положению после прекращения внешнего усилия, (2) обусловливающ тариф на котором молекула становит ориентировало в новом направлении когда изменено направление беспокоя усилия, (3) обусловливающ тариф на котором молекула вращает, (4) измеряющ длину молекулы, определенно когда она по крайней мере частично будет протягивана, или (5) измеряющ по крайней мере один диаметр сферически или эллипсоидальной молекулы. Измерения релаксации, реориентации, и тарифов вращения, так же, как длина и диаметр можно сделать использующ светлый микроскоп соединенный к обработчику изображения. Релаксацию, реориентацию и вращение молекулы также можно обусловить использующ микроскоп совмещенный с спектроскопическим приспособлением. Вымысел определенно полезн для измерять молекулы полимера, such as нуклеиновые кислоты, и может быть использован для того чтобы обусловить размер и расположение карты справочников ограничения. Обрыв больших молекул полимера установленных на скольжении микроскопа предотвращен путем конденсировать молекулы перед установкой и unfolding молекулы после того как они были помещены в матрице.
