A composition for in vitro and in vivo transfection of vertebrate male germ
cells comprises a nucleic acid or transgene, and a gene delivery system,
and optionally a protective internalizing agent, such as an endosomal
lytic agent, a virus or a viral component, which is internalized by cells
along with the transgene and which enhances gene transfer through the
cytoplasm to the nucleus of the male germ cell. A method of genetically
altering a vertebrate male germ cell in vivo employs a lentiviral-derived
vector. A method of substantially depopulating a vertebrate testis employs
a combination of a dose of an alkylating agent, such as busulfan,
chlorambucil, cyclophosphamide, melphalan, or ethyl ethanesulfonic acid,
and a dose of gamma radiation. A pharmaceutical preparation and a transfer
kit utilize the composition. A method for introducing a polynucleotide
into vertebrate male germ cells comprises the administration of the
composition to a vertebrate. A method for isolating or selecting
transfected cells utilizes a reporter gene, and a method for administering
transfected male germ cells utilizes male germ cells which have been
transfected in vitro.
Una composición para el transfection in vitro e in vivo de las células de germen masculinas vertebradas abarca un ácido nucleic o un transgene, y un sistema de la entrega del gene, y opcionalmente un agente de internación protector, tal como un agente lytic endosomal, un virus o un componente viral, que es internado por las células junto con el transgene y que realce transferencia del gene a través del citoplasma al núcleo de la célula de germen masculina. Un método genético de alterar una célula de germen masculina vertebrada in vivo emplea un vector lentiviral-derivado. Un método substancialmente de depopulating un testis vertebrado emplea una combinación de una dosis de un agente alkylating, tal como busulfan, chlorambucil, cyclophosphamide, melphalan, o ácido ethanesulfonic ethyl, y una dosis de la radiación gamma. Una preparación farmacéutica y un kit de la transferencia utilizan la composición. Un método para introducir un polynucleotide en las células de germen masculinas vertebradas abarca la administración de la composición a un vertebrado. Un método para aislar o seleccionar transfected las células utiliza un gene del reportero, y un método para administrar transfected las células de germen masculinas utiliza las células de germen masculinas que han sido transfected in vitro.
