Detection of phenols using engineered bacteria. A biosensor can be created
by placing a reporter gene under control of an inducible promoter. The
reporter gene produces a signal when a cognate transcriptional activator
senses the inducing chemical. Creation of bacterial biosensors is
currently restricted by limited knowledge of the genetic systems of
bacteria that catabolize xenobiotics. By using mutagenic PCR to change the
chemical specificity of the Pseudomonas species CF600 DmpR protein, the
potential for engineering novel biosensors for detection of phenols has
been demonstrated. DmpR, a well-characterized transcriptional activator of
the P. CF600's dmp operon mediates growth on simple phenols. Transcription
from Po, the promoter heading the dmp operon, is activated when the sensor
domain of DmpR interacts with phenol and mono-substituted phenols. By
altering the sensor domain of the DmpR, a group of DmpR derivatives that
activate transcription of a Po-lacZ fusion in response to eight of the
EPA's eleven priority pollutant phenols has been created. The assays and
the sensor domain mutations that alter the chemical specificity of DmpR is
described.
Deteção dos phenols usando as bactérias projetadas. Um biosensor pode ser criado colocando um gene do repórter sob o controle de um promoter inducible. O gene do repórter produz um sinal quando um activador cognate do transcriptional deteta o produto químico de indução. A criação de biosensors bacterianos é restringida atualmente por conhecimento limitado dos sistemas genetic das bactérias que catabolize o xenobiotics. Usando PCR mutagenic mudar o specificity químico da proteína da espécie CF600 DmpR dos pseudomonas, o potencial para biosensors da novela da engenharia para a deteção dos phenols foi demonstrado. DmpR, um activador bem-caracterizado do transcriptional do operon do dmp de P. CF600's medía o crescimento em phenols simples. A transcrição do Po, promoter que dirige o operon do dmp, é ativada quando o domínio do sensor de DmpR interage com o phenol e os phenols mono-substituídos. Alterando o domínio do sensor do DmpR, um grupo dos derivatives de DmpR que ativam a transcrição de uma fusão Po-lacZ-lacZ em resposta a oito phenols do pollutant da prioridade do EPA dos onze foi criado. Os assays e os mutations do domínio do sensor que alteram o specificity químico de DmpR são descritos.
