This invention describes a method of removing N-terminal alanine residues
from polypeptides, preferably recombinant proteins, using an
aminopeptidase derived from the marine bacterium Aeromonas proteolytica.
Accordingly, Aeromonas aminopeptidase (AAP; E.C. 3.4.11.10) can be used to
remove N-terminal alanyl residues from derivatives of human somatotropin
(hST, human growth hormone, or hGH), porcine somatotropin (pST), and
bovine somatotropin (bST), for example, to yield proteins having their
native amino acid sequences. The enzyme reactions can be carried out in
free solution, or the AAP can be immobilized on a solid support, for
reactions carried out in vitro. An efficient method for converting Ala-hGH
to hGH, for example, comprises expression of Ala-hGH in E. coli, recovery
of inclusion bodies, solubilization and refolding in detergent, detergent
removal by ultrafiltration, selective precipitation, enzyme cleavage,
followed by two column chromatography steps.
Deze uitvinding beschrijft een methode om n-Eindalanine residu's uit polypeptiden, bij voorkeur recombinante proteïnen te verwijderen, gebruikend aminopeptidase die uit mariene bacterieaeromonas proteolytica wordt afgeleid. Dienovereenkomstig, Aeromonas aminopeptidase (AAP; E.G. 3.4.11.10) kan worden gebruikt om n-Eindalanylresidu's uit derivaten van menselijke somatotropin (hST, menselijk de groeihormoon, of hGH), varkenssomatotropin (pST), en rundersomatotropin (bST) te verwijderen, bijvoorbeeld, om proteïnen op te brengen die hun inheemse aminozuuropeenvolgingen hebben. De enzymreacties kunnen in vrije oplossing worden uitgevoerd, of AAP kan op een stevige steun, voor in vitro uitgevoerde reacties worden geïmmobiliseerd. Een efficiënte methode om ala-HGH in hGH om te zetten, bijvoorbeeld, bestaat uit uitdrukking van ala-HGH in E. coli, terugwinning van opnemingsorganismen, oplosbaar maken en het refolding in detergent, detergent verwijdering door ultrafiltratie, selectieve precipitatie, enzymsplijten, dat door twee stappen van de kolomchromatografie wordt gevolgd.
