The present invention provides sensitive methods for detecting the presence
or absence of a difference between related nucleic acid sequences. In one
aspect of the invention, a method is provided for detecting a difference
in the sequence of two nucleic acid molecules. The method includes the
steps of: contacting two nucleic acids under conditions that allow the
formation of a four-way complex and branch migration; contacting the
four-way complex with a tracer molecule and a detection molecule under
conditions in which the detection molecule is capable of binding the
tracer molecule or the four-way complex; and determining binding of the
tracer molecule to the detection molecule before and after exposure to the
four-way complex. Competition of the four-way complex with the tracer
molecule for binding to the detection molecule indicates a difference
between the two nucleic acids. The methods disclosed can be used for
detecting nucleotide variations or mutations of an organism, for example,
single nucleotide polymorphisms (SNP), which leads to identification of
genetic traits associated with diseases or other phenotypic
characteristics.
La présente invention fournit des méthodes sensibles pour détecter la présence ou l'absence d'une différence entre les ordres relatifs d'acide nucléique. Dans un aspect de l'invention, une méthode est donnée pour détecter une différence dans l'ordre de deux molécules d'acide nucléique. La méthode inclut les étapes de : entrant en contact avec deux acides nucléiques dans les conditions qui permettent la formation d'un complexe à quatre voies et s'embranchent migration ; entrant en contact avec le complexe à quatre voies avec une molécule de traceur et une molécule de détection dans les conditions en lesquelles la molécule de détection est capable de lier la molécule de traceur ou le complexe à quatre voies ; et déterminant lier de la molécule de traceur à l'exposition de molécule de détection avant et après au complexe à quatre voies. La concurrence du complexe à quatre voies avec la molécule de traceur pour lier à la molécule de détection indique une différence entre les deux acides nucléiques. Les méthodes révélées peuvent être employées pour détecter des variations de nucléotide ou des mutations d'une organization, par exemple, les polymorphismes simples de nucléotide (SNP), qui mène à l'identification des traits génétiques liés aux maladies ou à d'autres caractéristiques phénotypiques.
