Covalently bound non-polar tags are used to increase the retention times of
double stranded polynucleotides on Matched Ion Polynucleotide
Chromatography (MIPC) columns. In doing so, separations of DNA mixture
components is improved. Additionally, when the non-polar tags are
fluorophores, detection limits are also greatly reduced. Strategically
tagged primers are used in conduction with PCR to produce DNA fragments
having specifically tagged strands. This improves mutation detection by
MIPC in several ways. Separations are improved, detection sensitivity is
enhanced, and non-stoichiometric addition of wild type DNA prior to
hybridization is now possible since only tagged fragments will be observed
with a fluorescence detector. Non-polar tags are also used as a novel
alternative to G-C clamping during MIPC under partially denaturing
conditions. Reversible DNA binding dyes, such as DNA intercalator dyes and
DNA groove binding dyes, are used to reduce the detection limit of
polynucleotides separated by MIPC.
In covalenza limiti le modifiche non polari sono usati aumentare i tempi di ritegno di doppi polynucleotides incagliati sulle colonne abbinate di cromatografia di Polynucleotide dello ione (MIPC). In tal modo, le separazioni dei componenti della miscela del DNA è migliorata. Ulteriormente, quando le modifiche non polari sono fluorophores, i limiti di segnalazione inoltre notevolmente sono ridotti. Gli iniettori strategico etichettati sono utilizzati nella conduzione con PCR per produrre i frammenti del DNA specificamente che etichettano i fili. Ciò migliora la rilevazione di mutazione da MIPC in parecchi sensi. Le separazioni sono migliorate, la sensibilità di rilevazione è aumentata e l'aggiunta non-stechiometrica di tipo selvaggio DNA prima dell'ibridazione ora è possibile poiché soltanto i frammenti etichettati saranno osservati con un rivelatore di fluorescenza. Le modifiche non polari inoltre sono usate come alternativa del romanzo a GASCROMATOGRAFIA che preme durante il MIPC nelle circostanze parzialmente denaturanti. Le tinture rovesciabili del grippaggio del DNA, quale il intercalator del DNA si tinge ed il grippaggio della scanalatura del DNA si tinge, è usato ridurre il limite di segnalazione dei polynucleotides separati da MIPC.
